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[其他]逆向斑點(diǎn)分子雜交技術(shù)無(wú)效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 85109606 申請(qǐng)日: 1985-12-05
公開(公告)號(hào): CN85109606A 公開(公告)日: 1987-06-17
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 陳淵卿;顧健人 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 上海市腫瘤研究所
主分類號(hào): C12Q1/70 分類號(hào): C12Q1/70;C12N15/00;G01N33/576
代理公司: 上海專利事務(wù)所 代理人: 吳淑芬
地址: 上海市東安*** 國(guó)省代碼: 上海;31
權(quán)利要求書: 查看更多 說(shuō)明書: 查看更多
摘要: 一種逆向斑點(diǎn)分子雜交技術(shù),它適用于人體乙肝病毒的檢測(cè)。本發(fā)明通過(guò)HBV內(nèi)源聚合酶的作用,以標(biāo)記dNTP參入血清,得到標(biāo)記HBVDHA,作為分子探針,與標(biāo)準(zhǔn)的HBVDHA作逆向斑點(diǎn)分子雜交,從而既測(cè)定了乙肝病毒HBVDHA聚合酶的活力,又顯示了HBVDHA的存在。它克服了單獨(dú)測(cè)定HBVDHA、HBVDHA,聚合酶或血清免疫標(biāo)志的缺點(diǎn),成為確定HBV感染的直接而可靠的依據(jù)。
搜索關(guān)鍵詞: 逆向 斑點(diǎn) 分子 雜交 技術(shù)
【主權(quán)項(xiàng)】:
1、一種逆向斑點(diǎn)分子雜交的檢測(cè)方法,包括以下步驟對(duì)含有完整HBVDHA順序的重組質(zhì)粒作變性處理;將所述經(jīng)變性處理的重組質(zhì)粒放入冰溶中速冷;在所述速冷后的重組質(zhì)粒內(nèi)加入氫氧化鈉使后者的濃度為0.2-0.50克分子;將所述的氫氧化鈉溶液點(diǎn)樣于硝基纖維濾膜,并使之干燥;將所述點(diǎn)樣后的濾膜用緩沖系統(tǒng)浸泡中和,并使之干燥;將所述干燥后的濾膜放入預(yù)雜交液中進(jìn)行預(yù)雜交;將受撿血清加入非離子去垢劑及聚合酶保護(hù)劑;將所述血清再加入包含緩沖系統(tǒng)及四種DHA合成的前生物三磷酸脫氧核苷、其中至少有一種帶有可顯示的標(biāo)記物的反應(yīng)混合液、進(jìn)行培育、制成含標(biāo)記物的HBVDHA分子探針;將所述含標(biāo)記物的HBVDHA分子探針加入雜交混合液,作變性處理,制成單鏈的含標(biāo)記物的HBVDHA分子探針;將所述的單鏈含標(biāo)記物的HBVDHA分子探針放入冰浴中速冷;將所述速冷后的單鏈的含標(biāo)記物的分子探針與上述經(jīng)預(yù)雜交液雜交處理的硝基纖維雜交濾膜雜交,并用洗脫液洗去未雜交的游離的標(biāo)記物;將所述雜交后的硝基纖維雜交濾膜干燥后,通過(guò)標(biāo)記物顯示的方法來(lái)判定受撿血清中感染性的HBV的存在。
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