[發(fā)明專利]活性蛋白C制劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 98804567.2
• 申請日: 1998-04-24
• 公開（公告）號: CN1254284A
• 公開（公告）日: 2000-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: A·D·卡爾森;T·A·舍利加
• 申請（專利權(quán)）人: 伊萊利利公司
• 主分類號: A61K31/715
• 分類號: A61K31/715
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 盧新華,楊麗琴

本申請要求1997年4月28日申請的美國臨時申請60/045255的優(yōu)先權(quán)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人類藥物領(lǐng)域，特別涉及用活性蛋白C治療血管疾病。更具體地說，本發(fā)明涉及活性人蛋白C的制劑。

發(fā)明背景

蛋白C是絲氨酸蛋白酶和天然存在的抗凝劑，其通過在凝結(jié)級聯(lián)反應(yīng)中滅活因子Va和VIIIa而調(diào)節(jié)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。人蛋白C體內(nèi)主要在肝臟中合成，是單一的461個氨基酸的多肽。這個單鏈母體分子經(jīng)歷多個翻譯后修飾，包括1)裂解42個氨基酸信號序列；2)蛋白酶解從一個鏈酶原去除位置156處的賴氨酸殘基和位置157處的精氨酸殘基，制備成2-鏈酶原形式的分子(即通過二硫橋與含有絲氨酸蛋白酶的262個氨基酸殘基的重鏈連接的155個氨基酸殘基的輕鏈)；3)在輕鏈的前42個氨基酸中聚簇的9個谷氨酸殘基的維生素K-依賴性羧化作用，產(chǎn)生9個γ-羧基谷氨酸殘基；和4)在4個位點(一個在輕鏈中和三個在重鏈中)連接碳水化合物。重鏈含有已充分研究的Asp257，His211和Ser360絲氨酸蛋白酶三聯(lián)體。最后，成環(huán)的2-鏈酶原在鈣離子存在下在磷脂表面被凝血酶體內(nèi)激活。激活作用來自去除重鏈的N-末端處的十二肽，產(chǎn)生具有酶活性的活性蛋白C(aPC)。

除了血液凝結(jié)級聯(lián)反應(yīng)中aPC的酶活性外，aPC也可以自身降解，導(dǎo)致作為一種抗凝劑的降低的功能性。申請人發(fā)現(xiàn)了重要的降解途徑。輕鏈的N-末端的自身降解可以導(dǎo)致位置10處組氨酸殘基任一側(cè)上的切斷。這樣，該降解途徑得到兩種滅活產(chǎn)物；1)去(1-9)活性蛋白C，其中去除了輕鏈的前9個N-末端殘基；和2)去(1-10)活性蛋白C，其中去除了輕鏈的前10個N-末端殘基。該降解途徑先前沒有報道過，其由于去除位置6和7處的重要的GLA殘基而導(dǎo)致抗凝活性降低。因此，降低去(1-9)和去(1-10)活性蛋白C自身降解產(chǎn)物水平在獲得強效高純度的活性蛋白C藥物制劑中是重要的。這些變體產(chǎn)物是先前未知的降解產(chǎn)物，并且通過常規(guī)純化技術(shù)是非常難以去除的。申請人進一步發(fā)現(xiàn)在選定的一組填充劑的存在下固態(tài)溶解性明顯提高。

十分期望將溶液和凍干固態(tài)中的活性蛋白C的這樣的降解最小化。因此，這些發(fā)現(xiàn)允許制備對于健康護理從業(yè)者來說是優(yōu)良藥物的強效高純度的活性蛋白C制劑。

本發(fā)明提供基本上沒有這樣的自身降解產(chǎn)物特別是活性蛋白C的輕鏈的去(1-9)和去(1-10)形式的改進的活性蛋白C的制劑。因此，所說的制劑適合對需要它的患者給藥。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供含有活性蛋白C和選自甘露糖醇，海藻糖，棉子糖，蔗糖及其混合物的填充劑的穩(wěn)定凍干制劑。

本發(fā)明還提供含有大約2.5mg/ml活性蛋白C，大約15mg/ml蔗糖和大約20mg/ml氯化鈉的穩(wěn)定凍干制劑。此外，本發(fā)明提供含有大約5mg/ml活性蛋白C，大約30mg/ml蔗糖和大約38mg/ml氯化鈉的穩(wěn)定凍干制劑。

本發(fā)明還提供了制備含有活性蛋白C和選自甘露糖醇，海藻糖，棉子糖，蔗糖及其混合物的填充劑的制劑的方法。

本發(fā)明還提供單位劑量形式，包括含有制劑的單位劑量容器，所述制劑中重量與重量比例是大約1份活性蛋白C，大約7.6份鹽和大約6份填充劑。

本發(fā)明進一步提供治療涉及血管內(nèi)凝結(jié)的疾病狀態(tài)的方法，包括給予這里所描述的活性蛋白C的制劑。

發(fā)明詳述

為了本發(fā)明目的，按照這里所公開的和權(quán)利要求書所要求的，下面的術(shù)語如下定義。

aPC或活性蛋白C指或者重組或者血漿產(chǎn)生的活性蛋白C。aPC包括和優(yōu)選是人活性蛋白C，但是aPC也可以包括具有蛋白C的蛋白水解活性，酰胺水解活性，酯水解活性和生物活性(抗凝劑或血纖維蛋白溶酶原)的其它種類或衍生物。蛋白C衍生物的例子描述于Gerlitz等美國專利5453373和Foster等美國專利5516650，其中全部內(nèi)容在這里引作參考。

APTT--激活的部分組織促凝血酶原激酶時間。

r-hPC--重組人蛋白C酶原。

r-aPC--通過體外或體內(nèi)激活蛋白C酶原或者通過從原核細胞，真核細胞或者轉(zhuǎn)基因動物直接分泌激活形式的蛋白C來制備的重組活性蛋白C，包括，例如從人腎293細胞分泌酶原后根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的和在Yan的美國專利4981952和Cottingham的WO97/20043中證明的技術(shù)純化和激活，這兩篇專利全部在此引作參考。

連續(xù)灌輸--基本上不間斷地連續(xù)將溶液灌注到血管中，灌注一段特定時間。

大丸劑注射--以確定量(稱之為大丸劑)一次注射藥物。