[發(fā)明專利]用于將治療活性物質轉移到靶細胞中的組合物及其在基因治療中的應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 98117551.1
• 申請日: 1998-07-01
• 公開（公告）號: CN1212890A
• 公開（公告）日: 1999-04-07
• 發(fā)明（設計）人: R·比紹夫;H·考伯;K·舒格哈特
• 申請（專利權）人: 特朗斯吉恩有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/20;A61K31/73;A61K38/02;A61K38/22;A61K38/43;A61K39/12;A61K39/395
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 陳文平

本發(fā)明涉及一種能夠用于將治療活性物質轉入靶細胞的組合物，特別是脊椎動物細胞，更具體說是哺乳動物細胞。更具體地說，本發(fā)明涉及用這種組合物制備一種載體，用該載體將治療活性物質，特別是一種多聚核苷酸轉移到靶細胞中。

遺傳性疾病特別是由于特異基因的異常表達或非功能性突變多肽的表達。例如囊性纖維化被認為是最常見的致死性遺傳疾病(1/2000)且平均壽命期望值為20到30年，且該疾病是以粘膜分泌物的大幅增稠，慢性肺病以及外分泌腺-胰臟的功能不全為特征的。所述疾病同電解質轉運的紊亂有關，特別是跨躍上皮細胞膜的氯離子，這種紊亂是CFTR(囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)蛋白)基因突變的結果(Rommens,科學(Science)245(1989),1059-1066；Rosenfeld,Chest109(1996),241-252)。看起來對這種類型的疾病最合適的治療方法是將編碼有功能CFTR蛋白的基因轉入靶細胞以糾正觀察到的細胞異常。對于這種方法，也叫基因療法，幾位文章作者認為可選擇呼吸道上皮細胞作為靶細胞，這特別地是由于呼吸道上皮的易接近性，尤其可通過肺內運輸的方法，例如向肺中滴注。已經證明必須使靶細胞內表達水平達到正常CFTR基因表達量的約5％～7％才能使所觀測的電解質轉運恢復。類似地，一些出版物描述了通過將基因轉入癌靶細胞的技術以消除腫瘤或延緩癌癥進一步發(fā)展的可能性。已經考慮過一些方法，特別是轉移能誘導或激活抗腫瘤細胞介導免疫反應的免疫刺激基因(免疫療法)，提及的可用于給藥的基因可以是編碼細胞因子的基因，將產毒素的細胞毒素基因轉移到能表達該基因的細胞中，例如1型單純皰疹病毒(HSV-1)的tk基因；或者轉移抗致瘤基因-即腫瘤抑制基因，例如成視網膜細胞瘤基因或p53基因；或者是能夠抑制致癌基因活性的多核苷酸，例如反義分子或能夠降解致癌基因特異信使RNA的核酶。

在過去的30年中，已建立了大量將不同異源基因引入細胞，特別是哺乳動物細胞的方法。可將這些不同的方法分為兩類。第一類涉及到象微注射，電穿孔或粒子轟擊一類的物理方法，這些方法雖然有效，但是在很大程度上限于體外應用，方法的實施是麻煩而棘手的。第二類涉及到分子及細胞生物學技術，將要轉移的基因與可促進所述物質轉移的生物或合成載體聯合起來。

目前最有效的載體是病毒載體，特別是腺病毒或逆轉錄病毒載體。這些已經開發(fā)出的技術是以這些病毒所具有的天然特性為基礎的，病毒所擁有的這些特性可使之穿過細胞膜，避免遺傳物質被降解并能使其基因組穿入細胞核。這些病毒已經在大量研究中作為實驗對象，而且其中有些病毒已經試驗性地用作人的基因載體，并著眼于用作如疫苗，免疫治療或為了補償遺傳性缺陷的療法。然而，這一使用病毒的方法受到大量限制，特別是由于病毒基因組有限的克隆能力，已經生產的感染性病毒粒子在宿主生物體和環(huán)境中傳播的危險性，在宿主細胞中因插入而導致人工突變的危險，以及就逆轉錄病毒載體而言，在體內治療過程中誘發(fā)強烈的免疫反應及炎性反應的事實，因此實際上限制了可以設想的用藥方法的數量(McCoy，人類基因治療(Human?Gene?Therapy)6(1995)，1553-1560；Yang，免疫(Immunity)1(1996)；433-442)。這許多缺陷，特別是用于人的病毒載體的情況，引導許多機構為轉移多核苷酸而開發(fā)設計可替代的方式。