[發明專利]修飾和嵌合的超抗原及其用途

無效

• 申請號: 97190630.0
• 申請日: 1997-03-26
• 公開（公告）號: CN1194651A
• 公開（公告）日: 1998-09-30
• 發明（設計）人: P·安頓森;J·漢森;P·布耶爾克;M·多爾斯藤;T·卡蘭德;L·阿布拉姆森;G·福爾斯堡
• 申請（專利權）人: 法馬西亞及厄普約翰公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K47/48;A61K39/395;C07K14/31
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 羅宏,楊九昌

本申請已通過瑞士專利中請NO?9601245-5和美國專利申請08/695,692獲得優先權，它們是分別于1996年3月29日和1996年8月12日提交的，在此均被引入作為參考。發明領域

本發明是關于具有功能活性的修飾超抗原，它是野生型超抗原(SAI)，其中一個或幾個氨基酸殘基被取代，但仍然保留超抗原功能。當一個或幾個這種取代殘基(或者是其一個保守的氨基酸殘基)出現在另一個野生型超抗原(SA?II)相應的位置時，此修飾的超抗原被稱為嵌合體(有時稱為雜種分子)。嵌合超抗原因此將包含有來自至少二個不同野生型超抗原的部分序列/區段。

所謂“相應的”意指，相互取代的殘基，部分序列和區段在超抗原I和II中具有功能上相同的位置，這樣，取代將導致形成能象超抗原一樣行使功能的嵌合體形式。

專門術語移植(grafted/grafting/graft)可用于連接超抗原II完整序列的各部分，此超抗原II已具有被取代的超抗原I的相應部分，即使是僅有單獨一個氨基酸被取代了。

修飾/嵌合超抗原也包括以其它方式修飾的功能性超抗原，例如，在除了與本發明有關的其它各區域內通過氨基酸取代進行修飾，結合于一個尋靶部分，當該部分是多肽/蛋白質時，也包括構成融合形式。實施修飾的程序也可以改變。見下文。超抗原

根據最初的定義(大約1988-1993)，超抗原是細菌或病毒蛋白質，它能夠與II類MHC(MHC?Class?II)抗原結合而無需經過細胞內預先處理，并能夠通過與T細胞受體(TCR)的β-鏈可變區(Vβ)結合而被激活T細胞。這種結合將導致T細胞相當大部分/亞群的Vβ系有限制的激活，并且導致IJ類MHC表達細胞的溶解(超抗原依賴性細胞介導的細胞溶解＝SDCC)。

葡萄球菌腸毒素(SEA，SEB，SEC1，SEC2，SED，SEE和SEH)是符合上述定義的被熟知的野生型超抗原。另一些實例有：中毒性休克癥毒素1(TSST-1，也來源于葡萄球菌)，剝落毒素(Exft)，鏈球菌熱原外毒素A，B，和C(SPE?A，B和C)，小鼠乳房腫瘤病毒蛋白(MMTV)，鏈球菌M蛋白，產氣莢膜梭菌腸毒素(CPET)，關節炎支原體超抗原等。有關超抗原及其特性的綜述參見文獻Kotjin等1993。

在九十年初曾發現，在超抗原與能夠結合于細胞表面結構的尋靶部分結合的情況下，激活和隨后的細胞溶解，可能以不依賴II類MHC的方式進行(Dohlsten?et?al?WO?9201470和Abrahmsen?et?alWO?9601650)。當靶細胞(攜帶有適合尋靶部分的靶標結構)和效應細胞(T細胞)與此結合物共同溫育時，靶細胞將被溶解(超抗原抗體依賴性細胞介導的細胞溶解＝SADCC)，完全不需要II類MHC的表達。根據當前有關超抗原的概念以及在本發明中的應用，如果不另行說明，它應包括能夠結合于細胞表面結構(靶標結構)和一條以上多形TCR鏈，特別是Vβ鏈的任何化合物(優選的是多肽結構)，并因此而能夠激活涉及此結合過程的，表達特異性TCR鏈的T細胞亞群。這些T細胞將因此而變成對攜帶有表面結構(靶標結構，靶細胞)的細胞具有細胞毒性。通常被激活的T細胞亞群占T細胞個體總量的約1-20％。技術背景-

利用突變和嵌合的超抗原進行的結構功能研究。

對包含有點突變形式的嵌合超抗原，以前曾有論述(Kappler?etal?WO?9314364，Kappler?et?al?1992，Grossman?et?al?1991，Hufnagle?et?al?1991，Hartwig?et?al?1993，Fraser?et?al1993，Mollick?et?al1993，Irwin?et?al?1992，Hudson?et?al1993，和Blanco?et?al?1990)。Mollick?et?al和Hudson?et?al根據對嵌合體的研究顯示，SEA和SEE的Vβ特異性定位在存在于羧基末端區域的某些氨基酸序列中(即氨基酸殘基200，206和207)。除了主要取決于此區域的Vβ特異性之外，Mollik?et?al還能夠證明，為了完全重組與SEA同樣活性的SEE，并且此SEA包含有針對Vβ8的SEE移植體，需要一個來自SEE的，含有N-末端70個氨基酸殘基的片段。此片段含有類似SEE的II類MHC?α鏈結合位點部分，并且，包含有來自SEE這部分的嵌合SEA/SEE分子，以類似于SEE的方式抑制了SEA對II類MHC?DRl的結合。