[發明專利]用于基因治療的含雜交啟動子的核酸構建體

無效

• 申請號: 97119658.3
• 申請日: 1997-09-23
• 公開（公告）號: CN1179470A
• 公開（公告）日: 1998-04-22
• 發明（設計）人: K－H·塞法特;R·穆勒;H－H·斯德拉斯克
• 申請（專利權）人: 赫徹斯特股份公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N5/10;C07H21/00;A61K48/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 李瑛

1.一種用于在宿主細胞中調節轉基因表達的核酸構建體，這種核酸構建體包含：

至少一種含有第一突變的核酸序列，這種突變抑制所說的轉基因正常表達，和

至少一種含有第二種突變的核酸序列，這種突變消除由第一突變產生的抑制作用。

2.權利要求1的用于在宿主細胞中調節轉基因表達的核酸構建體，其中：

(i)當所說的含有所說的第一突變的核酸序列是包含抑制所說的轉基因的轉錄和/或翻譯，或者抑制藥理活性化合物的功能的突變的轉基因(b)時，所說的核酸構建體還包含第一啟動子或增強子序列(a)，此序列定位在所說轉基因5′末端的上游，或者

(i′)當所說的含有所說的第一突變的核酸序列是包含抑制第一啟動子的功能的突變的啟動子或增強子序列(a′)時，所說的核酸構建體還包含編碼藥理活性化合物的轉基因(b′)。

3.按照權利要求1或2的用于在宿主細胞中調節轉基因表達的核酸構建體，這種核酸構建體在5′至3′末端方向的閱讀框架中包含下列組件：

(i)激活所說的轉基因轉錄的第一啟動子或增強子序列(a)，或包含抑制第一啟動子功能的突變的第一啟動子或增強子序列(a)；

(ii)編碼藥理活性化合物的轉基因(b′)或者包含一種突變的轉基因(b)，這種突變抑制所說的轉基因的轉錄和/或翻譯，或者抑制由所說的轉基因編碼的藥理活性化合物的功能；

(iii)第二啟動子或增強子序列(c)，這種序列激活組件(d)的基礎轉錄或包含抑制第二啟動子功能的突變；和

(iv)編碼消除啟動子(a)和(c)至少之一或轉基因(b)中突變之tRNA或調節蛋白的基因。

4.權利要求3的核酸構建體，其中所說的啟動子(a)和(c)是非特異性的、細胞特異性或病毒特異性的，并且其中啟動子(a)和(c)可以被包括下列幾種激活機制在內的至少一種機制激活：非特異性地、病毒特異性地、代謝性地、由四環素、由氧不足、細胞特異性地和細胞周期特異性地。

5.如權利要求1-4之任一所要求的核酸構建體，其中所說的轉基因(b)包含核保留信號(NRS)，這種核保留信號在其5′末端直接或間接和轉基因的3′末端連接，并且，其中所說的NRS的轉錄產物提供結合核輸出因子(NEF)的結構。

6.權利要求5的核酸構建體，這種核酸構建體還包含下列組件：

(v)激活NEF基礎轉錄的第三啟動子或增強子序列(i)；和

(vi)編碼和NRS轉錄產物結合進而介導轉基因轉錄產物從細胞核向細胞質轉運的NEF(k)的核酸序列。

7.權利要求3或4的核酸構建體，其中所說的啟動子或增強子序列(a)和(c)是相同的。

8.如權利要求3-7之任一所要求的核酸構建體，其中啟動子或增強子序列(a)和(c)至少之一是含有啟動子組件CDE-CHR或E2FBS-CHR的嵌合啟動子，其中所說的啟動子組件對下游基因的表達起作用，并且和鄰區、上游、激活物序列相互作用。

9.如權利要求1-8之任一所要求的核酸構建體，其中所說的下游基因的表達是受細胞周期特異性抑制的。

10.權利要求6的核酸構建體，其中啟動子或增強子序列(a)、(c)和(i)至少之一是包含下列組件的激活物響應啟動子單位：

(vii)至少一種啟動子或增強子序列(e)，這種啟動子或增強子序列由包括下列幾種激活方法在內的至少一種方法激活：非特異性地、病毒特異性地、代謝性地、由四環素、細胞特異性地和細胞周期特異性地；

(viii)至少一種位于啟動子或增強子序列(e)下游的激活物亞單位(f)，并且其中所說的激活物亞單位的基礎轉錄由啟動子或增強子序列(e)激活；和

(ix)一種激活物響應啟動子(g)，這種啟動子由該激活物亞單位(f)或幾種相同亞單位(f)或不同激活物亞單位(f′)的表達產物激活。

11.權利要求10的核酸構建體，其中啟動子或增強子序列(a)、(c)或(i)和激活物響應啟動子(g)至少之一是嵌合啟動子，并且激活物亞單位(f)是編碼至少一種激活嵌合啟動子的轉錄因子之基因。