[發明專利]絲氨酰組氨酸、磷酰化絲氨酸、磷酰化蘇氨酸用作核酸切割劑

無效

• 申請號: 96114313.4
• 申請日: 1996-12-13
• 公開（公告）號: CN1045448C
• 公開（公告）日: 1999-10-06
• 發明（設計）人: 趙玉芬;李向紅;麻遠;李永芳;萬榮;蔣宇揚
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C07K5/06;C07F9/02
• 代理公司: 清華大學專利事務所
• 代理人: 羅文群

1、一種將絲氨酰組氨酸作為核酸切割劑的用途，其特征在于被切割的核酸為DNA或RNA，其切割過程為：將絲氨酰組氨酸溶于無菌高純水，配成溶液，將此溶液與被切割的核酸即切割底物混合，切割底物為雙鏈線狀DNA、超螺旋質粒DNA和RNA，以20mM(毫摩爾/升)的伯瑞坦-羅比森(Britton-Robison)，由磷酸、乙酸、硼酸組成，其濃度分別為0.04M緩沖液作為緩沖體系，用氫氧化鈉調pH值在4.0-9.0的范圍，絲氨酰組氨酸的終濃度為-200毫摩爾/升(mM)，底物的終濃度為0.05-50mM(按單個堿基的濃度計算)，將絲氨酰組氨酸與底物的混合物置于10-80℃下保溫，保溫0-96h取出，即完成對底物的切割。

2、一種將磷酰化絲氨酸、磷酰化蘇氨酸作為核酸切割劑的用途，其特征在于被切割的核酸為DNA域RNA，割劑磷酰化絲氨酸為N-O,O-二異丙基磷酰化絲氨酸(DIPP-Ser)、N-O,O-二正丁基磷酰化絲氨酸(DBP-Ser)和N-O,O-二甲基磷酰化絲氨酸(DMP-Ser)，割劑磷酰化蘇氨酸為N-O,O-二異丙基磷酰化蘇氨酸(DIPP-Thr)和N-O,O-二正丁基磷酰化蘇氨酸(DBP-Thr)，其切割過程為：用無菌高純水配制濃度為280mM的飽和組氨酸溶液，將切割劑即磷酰化絲氨酸、磷酰化蘇氨酸溶于其中，配成溶液，然后將該溶液與被切割的核酸即切割底物混合，切割底物為雙鏈線狀DNA、超螺旋質粒DNA和RNA，以組氨酸作為緩沖體系，將pH值調整在7.5左右，組氨酸緩沖液的濃度范圍為10-280mM，切割劑的終濃度為0.5-200mM，底物的終濃度為0.05-50mM(按單個堿基的濃度計算)，最后將切割劑、組氨酸與底物的混合物置于10-80℃下保溫，保溫0-96h取出即完成底物切割。