[發(fā)明專利]核黃素的純化

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 96104219.2
• 申請日: 1996-03-01
• 公開（公告）號: CN1056845C
• 公開（公告）日: 2000-09-27
• 發(fā)明（設計）人: Ｅ·庫福
• 申請（專利權(quán)）人: 弗·哈夫曼－拉羅切有限公司
• 主分類號: C07D487/14
• 分類號: C07D487/14
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 李瑛

本發(fā)明涉及回收和純化發(fā)酵得到的核黃素的方法。

如眾所周知，核黃素(維生素B2)具有有價值的保鍵、醫(yī)藥(如抗腳氣病)和生長促進性質(zhì)，因而被廣泛地用作食品和飼料添加劑。其也可用作食品的黃色著色劑。另外，已知可用合成方法及各種不同的發(fā)酵方法，特別是可經(jīng)在適當?shù)臓I養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)、棉阿舒囊霉(Ashbya?gossypii)或阿舒假囊酵母(Eremothecium?ashbyii)而產(chǎn)生之。依據(jù)適當?shù)陌ǚ蛛x/回收和純化步驟在內(nèi)的特定生產(chǎn)方法，可使此得到的核黃素滿足某些質(zhì)量要求，例如用于動物飼料中，但不能滿足其他應用，特別是用于人類食品中。然而在過去，盡管廣泛深入地研究了合成后或發(fā)酵后分離/回收及純化方法，卻一直沒有達到適于其預期使用目的預期質(zhì)量。

本發(fā)明的目的是提供回收和純化以發(fā)酵方法產(chǎn)生的核黃素的方法，即回收和純化發(fā)酵已達到令人滿意的程度，最好是發(fā)酵完成后存在于所謂發(fā)酵肉湯(所說的肉湯下文稱為“發(fā)酵后肉湯”)中的核黃素的方法，該方法可使核黃素產(chǎn)物至少達到適于預期應用目的之可接受的質(zhì)量。

本發(fā)明提供了從發(fā)酵后肉湯中回收和純化核黃素的方法，其特征在于以下基本步驟：

(i)在大約45℃至120℃將所說的發(fā)酵后肉湯加熱約10分鐘至2小時，以進行巴氏滅菌，

(ii)將巴氏滅菌后的肉湯離心一次或多次，以得到主要由核黃素組成的產(chǎn)物，

(iii)在大約80℃至130℃溫度下用無機酸水溶液將前述步驟得到的產(chǎn)物處理約30分鐘至24小時和

(iv)從上述步驟的含水酸性介質(zhì)中過濾收集核黃素并用水洗滌之，及選擇性步驟：

(v)干燥前述步驟收集的洗過的產(chǎn)物，以提供達到實質(zhì)性純度的核黃素。

以這種方式回收并純化的核黃素一般具有至少96％的純度，并且在加適當?shù)奶砑觿┡渲撇⒓庸と鐕婌F干燥后，其很適于在動物食物方面的應用。

本發(fā)明還提供了(進一步)純化已從發(fā)酵后肉湯中回收并根據(jù)需要經(jīng)用無機酸水溶液處理、過濾和用水洗后已純化到一定程度的核黃素的方法，該方法的特征在于以下基本步驟：

(vi)從濃鹽酸和水中結(jié)晶所說的核黃素，

(vii)從上述步驟的酸性介質(zhì)中過濾收集固體核黃素并用水洗滌之，以及

(viii)干燥前述步驟收集的洗滌過的產(chǎn)物，以提供高純度的核黃素。

用于以這種方式(進一步)純化的，即包括前面指出的步驟(vi)、(vii)和(viii)的起始核黃素較好是用上文提到的包括步驟(i)、(ii)、(iii)和(iv)，并且還可包括步驟(v)的方法回收和純化的。但其也可以只是在步驟(i)和(ii)之后得到的核黃素。產(chǎn)物是高純度的，即純度一般至少為98％，并且繼后很適于人類使用，特別是用于食品和藥物中。

可用任何適當方法完成用于產(chǎn)生將根據(jù)本發(fā)明的方法回收和純化的核黃素的發(fā)酵過程本身。已知的發(fā)酵方法包括在適當?shù)臓I養(yǎng)培養(yǎng)基中，通常在需氧條件下培養(yǎng)枯草芽孢桿菌(B.sabtilis)、棉阿舒囊霉(Ashbya?gossypii)、阿舒假囊酵母(Eremothecium?ashbyii)、flaveri假絲酵母(Candida?flaveri)、丙酮丁醇酸菌(Clostridiumacetobutylicum)、釀酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)、產(chǎn)氨短桿菌(Brevibacterium?ammoniagenes)和Xylinus擬酵母(Torulopsis?xylinus)。用于生產(chǎn)核黃素的實際發(fā)酵方法對本發(fā)明來說是無關緊要的。但就本發(fā)明方法的基本條件而言，優(yōu)選的發(fā)酵產(chǎn)生核黃素的培養(yǎng)的微生物是枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。無論使用什么發(fā)酵方法，確定發(fā)酵已達到滿足的程度，特別是發(fā)酵完成的技術也是已知的，并且包括HPLC。