[發(fā)明專利]酵母菌Cu-金屬硫蛋白及其生產(chǎn)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 96100897.0
• 申請(qǐng)日: 1996-02-06
• 公開（公告）號(hào): CN1062306C
• 公開（公告）日: 2001-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林稚蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/16
• 分類號(hào): C12N1/16;C12N15/01;C12N13/00;C12P21/00;//;C12R1865)
• 代理公司: 北京大學(xué)專利事務(wù)所
• 代理人: 孫博寧

所屬技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明為利用Cu²⁺拮抗的釀酒酵母Saccharomyces?cerevisiaeBD101菌株發(fā)酵法產(chǎn)生金屬硫蛋白的技術(shù)。涉及MT產(chǎn)生菌及其金屬硫蛋白的特性；和金屬硫蛋白產(chǎn)生菌的發(fā)酵條件及金屬硫蛋白的分離、純化提取技術(shù)。

國(guó)內(nèi)、外研究現(xiàn)狀分析：

金屬硫蛋白(Metallothionein，簡(jiǎn)稱MT)是一類廣泛存在于生物中的低分子量、富含半胱氨、能被金屬誘導(dǎo)的金屬結(jié)合蛋白。生理功能廣泛，主要參與微量元素貯存、運(yùn)輸和代謝；拮抗電離輻；除羥基自由基及重金屬解毒等多種作用，涉及機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育、生殖、衰老、免疫、腫瘤發(fā)生、應(yīng)激反應(yīng)等各個(gè)方面。其研究與應(yīng)用在醫(yī)藥、保健食品和化妝品添加劑、農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護(hù)、生物工程等各領(lǐng)域已取得一些令人興奮的成果。1978年7月，1985年8月，1992年12月就召開過三屆關(guān)于研究金屬硫蛋白的國(guó)際會(huì)議。目前，MT的研究，已成為生物化學(xué)及分子生物學(xué)領(lǐng)域的熱門課題之一。

自1957年Margoshes,M.和Vallee,B.L.等報(bào)道從蓄積鎘的馬腎臟中分離出MT以來，現(xiàn)已能從幾乎所有哺乳動(dòng)物組織(結(jié)締組織除外)、某些兩棲類、魚類、植物和某些真核、原核微生物中分離得到。1975年P(guān)rinz,R.和Weser,U.等報(bào)道在釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中發(fā)現(xiàn)MT是真核微生物中有關(guān)MT的第一篇文章，迄今為止，在微生物MT近200篇文章中，1975-1985年10年時(shí)間里，只占13篇，自1985年來研究報(bào)道增多，多數(shù)文章為MT基因結(jié)構(gòu)、基因調(diào)控、MT基因啟動(dòng)子等理論文章，酵母菌MT應(yīng)用開發(fā)研究限于專利保護(hù)，報(bào)道極少，只有2篇。

從<CA>67年至92年7月檢索出有關(guān)酵母菌Metallothionein專利

1．Ger.OffenDE3,433,076(A1)

(Cl.C07k15/22)20Mar.1986

Appl.08Sep.1984;16pp.

題目：

Isolation?and?use?of?antirheumatic?copper?metallothioneins

Cu-MT的分離和抗風(fēng)濕病中的應(yīng)用

作者：

Weser,Ulrich;Hartmann,HansJuergen;Gaertner,Alfred

2．Ger.OffenDE3,920,826(A1)

(Cl.C07k15/04)03,Jan.1991

Appl.24Jan.1989;3pp.

題目：

Preparation?of?metallothionein?as?inflammation?inhibitors

炎癥抑制劑MT的制備

作者：

Weser,Ulrich;Hartmann,HansJuergen;Miesel,Ralf

真核微生物中金屬誘導(dǎo)產(chǎn)生的MT主要特征：低分子量(2,000-10,000道爾頓)，高金屬含量(含4-13個(gè)金屬原子/每分子MT)；氨基酸組成中半胱氨酸含量豐富(占6.8-43％)；沒有芳香族氨基酸或含量極微；具有金屬通過硫酯鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合的種種特殊吸收光譜行為；具有MT中典型的Cys-Xaa-Cys多肽序列(Cys表示半胱氨酸殘基，Xaa代表任一非特殊氨基酸殘基)與哺乳動(dòng)物中MT相比，其主要差別是：酵母菌MT中酸性氨基酸含量高(為哺乳動(dòng)物2-3倍)；Cys含量不同；有His(組氨酸)、Arg(精氨酸)等堿性氨基酸；另外酵母菌MT一般只被Cu²⁺、Ag²⁺誘導(dǎo)，不被其它金屬誘導(dǎo)。

根據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，56個(gè)屬酵母菌中，只發(fā)現(xiàn)酵母屬、裂殖酵母屬、假絲酵母屬等3個(gè)屬中7-8個(gè)種酵母菌有MT，國(guó)內(nèi)尚未見有關(guān)酵母菌MT的報(bào)道。

本發(fā)明的目的：

本發(fā)明所選育出的釀酒酵母BD101的金屬硫蛋白，與哺乳動(dòng)物金屬硫蛋白基本相似；經(jīng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)含MT釀酒酵母菌具有抗紫外線、⁶⁰Co輻射、消除羥基自由基和重金屬解毒能力，與哺乳動(dòng)物金屬硫蛋白生理功能相同；可適用于藥物、機(jī)能性食品或化妝品添加劑的應(yīng)用開發(fā)；也可應(yīng)用于貴重金屬回收、有毒重金屬?gòu)U水污染處理。酵母菌生長(zhǎng)迅速、繁殖快、原料價(jià)廉、培養(yǎng)簡(jiǎn)便，其金屬硫蛋白提取易于掌握，酵母菌金屬硫蛋白研制，在醫(yī)藥、食品、化妝品添加劑、貴重金屬回收和重金屬污染治理等應(yīng)用方面，將展現(xiàn)誘人的前景，這是本發(fā)明的主要目的。