[發明專利]非毒性、非產毒性、非致病性鐮孢屬表達系統及所用啟動子和終止子

無效

• 申請號: 95193875.4
• 申請日: 1995-06-15
• 公開（公告）號: CN1151762A
• 公開（公告）日: 1997-06-11
• 發明（設計）人: J·C·洛耶;D·L·墨耶;W·約德;J·R·舒斯特
• 申請（專利權）人: 諾沃諾爾迪斯克生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N5/10;C12P21/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 張閩

1.一種非毒性、非產毒性、非致病性重組鐮孢屬(Fusarium)宿主細胞，它包括一個與一個啟動子可操縱連接的編碼一種異源蛋白的核酸序列。

2.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述鐮孢菌是禾本科鐮孢(Fusarium?graminearum)。

3.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述禾本科鐮孢具有ATCC20334的鑒定特征。

4.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述異源蛋白是一種真菌蛋白。

5.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述異源蛋白是一種分泌性蛋白。

6.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述異源蛋白是一種真菌酶。

7.如權利要求6的宿主細胞，其中，所述真菌酶選自過氧化氫酶、漆酶、酚氧化酶、氧化酶、氧化還原酶、纖維素酶、木聚糖酶、過氧化物酶、脂肪酶、水解酶、酯酶、角質酶、一種蛋白酶、氨肽酶、羧肽酶、肌醇六磷酸酶、裂合酶、溶果膠酶、淀粉酶、葡糖淀粉酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、甘露糖苷酶、異構酶、轉化酶、轉移酶、核糖核酸酶、殼多糖酶和脫氧核糖核酸酶。

8.如權利要求6的宿主細胞，其中，所述真菌酶是一種蛋白酶。

9.如權利要求6的宿主細胞，其中，所述真菌酶是一種堿性蛋白酶。

10.如權利要求9的宿主細胞，其中，所述堿性蛋白酶是尖鐮孢(Fusarium?oxysporum)類胰蛋白酶蛋白酶。

11.如權利要求10的宿主細胞，其中，所述尖鐮孢類胰蛋白酶蛋白酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

12.如權利要求6的宿主細胞，其中，所述真菌酶是一種內切葡聚糖酶或其變體。

13.如權利要求14的宿主細胞，其中，所述內切葡聚糖酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：8所示。

14.如權利要求6的宿主細胞，其中，所述真菌酶是1，3脂肪酶或其變體。

15.如權利要求12的宿主細胞，其中，所述1，3脂肪酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：10所示。

16.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述異源蛋白選自激素，生長因子和受體。

17.如權利要求1的宿主細胞，其中，所述啟動子是一種真菌啟動子。

18.如權利要求17的宿主細胞，其中，所述啟動子選自來自構巢曲霉(A.nidulans)amdS的啟動子。

19.如權利要求17的宿主細胞，其中，所述真菌啟動子來自一個編碼尖鐮孢類胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段，該片段具有基本上與所述序列相同的啟動子活性。

20.如權利要求19的宿主細胞，其中，所述啟動子序列如SEQ?IDNO：5所示。

21.如權利要求1的宿主細胞，它還包括一個選擇標記。

22.如權利要求13的宿主細胞，其中，所述標記選自arg?B、trpC、pyrG、amdS、niaD和hygB。

23.如權利要求1的宿主細胞，它還包括一個終止子。

24.如權利要求23的宿主細胞，其中，所述終止子來自一個編碼尖鐮孢類胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段，該片段具有基本上與所述序列相同的終止子活性。

25.如權利要求24的宿主細胞，其中，所述終止子序列如SEQ?IDNO：6所示。

26.一種生產目的蛋白質的方法，它包括培養一種非毒性、非產毒性、非致病性重組鐮孢屬宿主細胞，該宿主細胞包括一個與一個啟動子可操縱連接的編碼所述蛋白質的核酸序列，以及分離所述蛋白質。

27.一種來自一個編碼尖鐮孢類胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段的啟動子序列，所述片段具有基本上與所述序列相同的啟動子活性，其中，該啟動子的序列如SEQ?ID?NO：5所示。

28.一種來自一個編碼尖鐮孢類胰蛋白酶蛋白酶的基因或其片段的終止子序列，所述片段具有基本上與所述序列相同的終止子活性，其中，該終止子的序列如SEQ?ID?NO：6所示。