[發明專利]提取絨毛膜促性腺激素的方法

無效

• 申請號: 93101329.1
• 申請日: 1993-02-15
• 公開（公告）號: CN1084858A
• 公開（公告）日: 1994-04-06
• 發明（設計）人: 王浦林
• 申請（專利權）人: 唐山市婦幼保健院
• 主分類號: C07K3/02
• 分類號: C07K3/02;C07K15/06;C07K15/14;C07K7/10;C07G15/00
• 代理公司: 唐山專利事務所
• 代理人: 趙述之

本發明涉及一種絨毛膜促性腺激素的制備方法，屬于生物化學制備方法。

絨毛膜促性腺激素（簡稱HCG），它由α-、β-兩亞基構成的糖蛋白，等電點PI3.2左右，易溶于水，不溶于有機溶劑，高滲鹽和有機物易破壞其空間結構，干品性質穩定。目前制取HCG是從懷孕5個月以內的孕婦尿液中用鹽析法制取，其工藝路線是孕尿 (苯甲酸乙醇飽和液)/() 吸附物 (95%乙醇)/() 粗制品 (NaAC緩沖液)/() 提取液 (冷丙銅)/() 沉淀 (NaAc緩沖液)/() 提取液 (95%乙醇)/() 沉淀物 (利凡諾溶液)/() 處理液 (冷丙酮冰Ac)/() 處理物 (NH₄Ac,Na₃PO₄,C_aAC₂)/() 去熱源- (NH₄Ac,乙醇 - 醋酸)/() 沉淀 (水、乙醚)/() 水溶液 (NaOH上清95%乙醇)/() 沉淀 (干燥)/() 純品HCG→HCG注射液，該工藝需使用有機溶劑9次，使用高滲鹽5次，每次使用均可造成HCG的三維空間結構發生改變和破壞情況，產品活性小，有的對此工藝做了一些改進，但仍不能擺脫有機-無機沉淀的原則。加之由尿排出的HCG是機體新陳代謝的末尾階段，HCG穩定性已下降，因此說上述工藝從制取的材料到制取技術都不理想，產品質量差，活性低。

本發明的目的在于克服現有技術中的不足之處而提供一種人工流產血清和絨毛組織中提取HCG的方法，在提取中不失活，產量高，產品質量好，成本低。

本發明的目的是這樣實現的：是以人工流產的血清和絨毛組織為原料，用逐級層析法提取絨毛膜促性腺激素（HCG）。首先用排阻層析法選出富含HCG段的流出液，經陽離子層析、陰離子層析、純化而制成HCG純品。

本發明的目的還可以通過以下措施來達到：排阻層析的分子篩材料用瓊脂糖凝膠類或葡聚糖凝膠類樹脂。用無菌血清裝柱，裝柱后柱床體積為柱長30-50厘米，柱徑5-10厘米，層析流動相為低濃度氧化鈉和純水交替使用，裝柱血清與床體積比為15-25%，此步驟是利用分子篩材料的物理性質，把血清中混合的各類蛋白質按體積大小順序分離，同時用紫外監測儀收集富含絨毛膜促性腺激素的流出液，該液體中不含大分子和小分子蛋白的混合液，約除去35-50%的雜蛋白，其主要成分是HCG和與其體積大小相近的一類蛋白質，包括血紅素Hb、α-球蛋白、血紅蛋白等，為澄清的紅色溶液，然后將此液用甲酸緩沖液電至PH為3.3，再通入陽離子層析柱，使等電點PI＞3.3的雜蛋白和陽離子層柱反應，變成紅黑色，并把這部分蛋白留在柱內，流出液是富含HCG和等電點PI＞3.3的雜蛋白混合物，為無色透明膠體液，再將膠體液用甲酸緩沖液調至PH2.9-3.0后注入陰離子層析柱，使PI＜3.0的雜蛋白被吸附，流出液是富含HCG和極微量的雜蛋白混合液，即為HCG粗品液。粗品經純化制成精品，純化方法是將HCG粗品液用堿性液調PH至7.5-8.5，以擴大HCG與雜蛋白間的靜電荷差，再通入陰離子層析柱使其與之反應，置干紫外自動監測儀上，用低鹽溶液或純水洗凈非特異吸附的蛋白，待基線平穩后用梯度洗脫液Na₂HPO₄-NaH₂PO₄-H₃PO₄系，PH為7.5-8.5設計梯度洗脫，在紫外監測儀下收集絨毛膜促性腺激素的峰段即為純品。

本發明相比背景技術具有以下優點：

1、用人工流產血清和絨毛組織替代了孕尿提取HCG，采用人工流產物，它便于收集貯運，在-20-30℃以下凍存6個月不失活，這就給收集貯運帶來方便，且來源廣，全國平均人工流產數達1/150，每個縣級醫院年人工流產平均在1000人次，約有血清100立升，另外血清中含HCG高，每升血清含30-60萬國際單位，是同量孕尿的100倍以上，因而經濟效益顯著，按80%的提取率折算，每立方米血清含3-6億國際單位的粗品，約含人民幣10-30萬元，針劑120萬元以上。

2、產品活性完整，質量好產量高。由于本發明采用逐級層析法提取HCG，理論上不存在失活因素，排阻層析是純物理作用，它是按分子體積大小分離蛋白，二級離子交換層析是依照每種蛋白質的自身在一定PH值緩沖液中帶電不同來分離，沒有造成HCG的三維空間結構破壞，因而產品不失活。

3、無污染，可形成連續性生產。

下面結合（附圖）實施例作進一步詳述：

附圖為本發明的工藝流程圖。