[發明專利]能夠在沙門氏疫苗菌株表面表達酸免疫瘧疾抗原的重組表達載體

無效

• 申請號: 91108728.1
• 申請日: 1991-09-07
• 公開（公告）號: CN1060498A
• 公開（公告）日: 1992-04-22
• 發明（設計）人: 約西母·失爾;伯哈德·納浦;艾理卡·亨特;漢斯·庫浦;艾岡·阿曼
• 申請（專利權）人: 柏林魏克股份公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/30;C12N15/44;C12N15/31;C12N1/21;//A61K39/112;39/015;39/145
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 黃革生

1、一種制備包括以下成分在內的重組表達型載體的方法：

(a)強誘導啟動子；

(b)編碼革蘭氏陰性細菌雜化OmpA蛋白的雜化基因；

(c)位于OmpA基因中相對于Ompa蛋白第三外環部分的克隆位點；

它是通過將編碼能夠在哺乳動物中誘導體液免疫應答的瘧疾抗原HRPⅡ或SERP或其一部分的DNA序列(d)插入到克隆位點(c)，所說的瘧疾抗原最好得自惡性瘧原蟲。

2、如權利要求1所述的制備重組表達型載體的方法，它另外將編碼流感血凝素（HA）蛋白1-48位和279-515位氨基酸的DNA序列（e）插入到所說的克隆位點（c），該DNA序列（e）在編碼HA蛋白的46位氨基酸處含有第一個克隆位點，在編碼HA蛋白的400位氨基酸處含有第二個克隆位點，其中所說的DNA序列（d）被插入到DNA序列（e）的至少一個所說克隆位點。

3、如權利要求1或2所述的制備重組表達型載體的方法，其中所說的HRPⅡ的部分由存在于具有表1所示限制性圖譜的重組表達載體pOmpA-6中的189個氨基酸組成。

4、如權利要求1或2所述的制備重組表達型載體的方法，其中所說的HRPⅡ的一部分由存在于具有表1所示限制性圖譜的重組表達載體pOmpA-3中的177個氨基酸組成。

5、如權利要求1或2所述的制備重組表達型載體的方法，其中所說的SERP的一部分含有與SH蛋白酶同源的區域。

6、如權利要求5所述的制備重組表達型載體的方法，它含有SERP的氨基酸442-892、573-595或745-787。

7、如權利要求1或2所述的制備重組表達型載體的方法，其中所說的SERP的部分含有至少一個T-細胞表面抗原。

8、如權利要求7所述的制備重組表達型載體的方法，它含有SERP的442-892氨基酸或640-700氨基酸。

9、按權利要求1-8中所述的任一項制備重組表達型載體的方法，其中所說的啟動子是受控于存在于同一表達載體分子上游的lac-阻遏物的tac-啟動子。

10、按權利要求1-9中所述任一項制備重組表達型載體的方法，其中所說的雜化基因（b）編碼一雜化蛋白，其中

（ba）編碼氨基酸1-233的DNA序列得自痢疾志賀氏菌OmpA基因;及

（bb）編碼氨基酸234-325的DNA序列得自大腸桿菌OmpA基因。

11、按權利要求1-10中所述的任一項制備重組表達型載體的方法，其中所說的克隆位點是一個具有核苷酸序列5′-ATCGATGCATATGCTGACCCATGGTACCCGGGGAGGCCT-3′的多聚連接子。

12、通過用權利要求1-11中任一項的重組表達載體進行轉化而制備轉化的沙門氏疫苗菌株的方法。

13、按權利要求12所述的制備轉化沙門氏疫苗菌株的方法，它得自傷塞沙門氏菌或鼠傷塞沙門氏菌。

14、制備能夠在哺乳動物中誘導體液免疫應答的重組融合蛋白的方法，它是用權利要求1-11中所述的任一項重組表達型載體轉化沙門氏疫苗菌株。

15、按權利要求14所述的制備重組融合蛋白的方法，其中所說的沙門氏疫苗菌得自傷塞沙門氏菌或鼠傷塞沙門氏菌。

16、用于預防瘧疾的疫苗的制備方法，它是將權利要求12或13所述的沙門氏疫苗菌或權利要求12或13所述的重組融合蛋白或權利要求14的重組融合蛋白與任意結合的可藥用載體或稀釋劑結合使用。

17、按權利要求12或13的沙門氏疫苗菌株或按權利要求14或15的重組融合蛋白的劑量的使用方法，所說的劑量適于誘導保護性體液免疫應答，適用于瘧疾的預防。