[發(fā)明專利]用于檢測(cè)博氏疏螺旋體的生物測(cè)定

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 91105020.5
• 申請(qǐng)日: 1991-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN1061245A
• 公開（公告）日: 1992-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·N·皮肯;H·C·安蒙斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 巴克斯特診斷技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/34
• 分類號(hào): C12P19/34;C12Q1/68;G01N33/50
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 曹恒興

1、一些具有互補(bǔ)鏈特異性的引物，連接在借助于核酸擴(kuò)增技術(shù)所要擴(kuò)增的博氏疏螺旋體的一個(gè)順序的側(cè)面，所述這些引物包括：

一個(gè)選自由若干順序構(gòu)成的一個(gè)組的第一低聚核苷酸，所述順序包括約8至32個(gè)基本連續(xù)的堿基，鞭毛蛋白基因轉(zhuǎn)錄密碼的核苷酸數(shù)從390到770，和

一個(gè)選自由若干在互補(bǔ)鏈上的順序構(gòu)成的一個(gè)組的第二低聚核苷酸，所述互補(bǔ)鏈位于與所述第一引物的5′端隔開約35至55個(gè)核苷酸處，所述順序包括約8至32個(gè)基本連續(xù)的堿基，相對(duì)于赫氏疏螺旋體的相應(yīng)的順序具有不大于70%的同系性。

2、一種用于檢測(cè)博氏疏螺旋體靶順序的低聚核苷酸示蹤物，包括：

一個(gè)低聚核苷酸探針順序，基本上同系于博氏疏螺旋體鞭毛蛋白基因轉(zhuǎn)錄密碼的一個(gè)順序，但對(duì)于赫氏疏螺旋體的相應(yīng)順序同系性不大于70%，以及

與所述探針相配合的信號(hào)物質(zhì)。

3、一種用于檢測(cè)生物樣品中的博氏疏螺旋體的生物測(cè)定法，包括：

提取核酸成分，

在存在具有對(duì)于一些順序的互補(bǔ)鏈特異性的引物的情況下使所述核酸變性，所述這些順序連接在鞭毛蛋白轉(zhuǎn)錄密碼編碼核酸的一個(gè)半保存區(qū)域的側(cè)面，

使所述引物與所述互補(bǔ)鏈順序雜交，

利用核酸擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增中間引物順序，

使被擴(kuò)增的中間引物順序與一個(gè)低聚核苷酸示蹤物雜交，該示蹤物包括一個(gè)具有基本上同系于博氏疏螺旋體的鞭毛蛋白轉(zhuǎn)錄密碼的一個(gè)相應(yīng)順序，但與赫氏疏螺旋體的相應(yīng)順序同系性不大于70%的順序的探針，以及連接于其上的產(chǎn)生信號(hào)的物質(zhì)，和

檢測(cè)由與所述被雜交的示蹤物相配合的所述信號(hào)產(chǎn)生物質(zhì)所發(fā)出的信號(hào)。

4、一種用于檢測(cè)博氏疏螺旋體核酸順序的基本同類的測(cè)定法，包括：

在存在具有對(duì)于一些順序的互補(bǔ)鏈特異性的一些引物的情況下使所述核酸順序變性，所述這些順序連接在鞭毛蛋白轉(zhuǎn)錄密碼編碼核酸的一個(gè)半保存區(qū)域的側(cè)面，

使所述引物與所述互補(bǔ)鏈順序雜交，

利用核酸擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增中間引物順序，

使被擴(kuò)增的中間引物順序與一個(gè)低聚核苷酸示蹤物雜交，該示蹤物包括一個(gè)具有基本上同系于博氏疏螺旋體的鞭毛蛋白轉(zhuǎn)錄密碼的一個(gè)相應(yīng)順序，但與赫氏疏螺旋體的相應(yīng)順序的同系性不大于70%的一個(gè)順序的探針，以及連接于其上的一熒光標(biāo)記物，以及

檢測(cè)熒光偏振增量。

5、核苷酸數(shù)從517延伸到742的博氏疏螺旋體鞭毛蛋白基因轉(zhuǎn)錄密碼的異常變異區(qū)域的一種變種順序，包括在位置531、549、552、612、613、684、693的鳥苷的、在位置539、591、603、622、639、651、666的腺苷的、在位置540、573、630、696的胸苷的和在位置735的胞嘧啶的一些堿基取代。

6、核苷酸數(shù)從517延伸到742的博氏疏螺旋體鞭毛蛋白基因轉(zhuǎn)錄密碼異常變異區(qū)域的一種變種順序，包括在位置531、595、612、649、和663的鳥苷的、在位置539、552、651、666、670和688的腺苷的、在位置540、571、594、630和696的胸苷的和在位置644和726的胞嘧啶的一些堿基取代。

7、一種用于檢測(cè)博氏疏螺旋體的一些亞組的低聚核苷酸示蹤物，包括

一個(gè)具有選自以下組的一個(gè)順序的低聚核苷酸探針，該組順序包括：

CTC??TGG??TGA??GGG??AGC??TCA??AAC??TGC

TCA??GGC??TGC??ACC??GGT??TCA??AGA??GGG??T，CTC

TGG??TGA??AGG??AGC??TCA??GGC??TGC??TCA??GAC

TGC??ACC??TGT??TCA??AGA??AGG和TGC??TGG??TGA

GGG??AGC??TCA??AGC??TGC??TCA??GGC??TGC??ACC

TGT??TCA??AGA??GGG??TGC，以及

與所述探針相配合的信號(hào)物質(zhì)。