[其他]人結晶胰島素原及其生產方法

無效

• 申請號: 88102311
• 申請日: 1988-04-20
• 公開（公告）號: CN88102311A
• 公開（公告）日: 1988-11-09
• 發明（設計）人: 理查德·李·杰克遜;埃迪·赫爾曼·梅西
• 申請（專利權）人: 伊萊利利公司
• 主分類號: C07K7/40
• 分類號: C07K7/40;C07K3/12
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 林玉貞

重組DNA操作技術的出現已給生產各種各樣的肽和蛋白質提供了可能。人胰島素原便是這類蛋白質中的一種，它既可用作生產人胰島素的中間體，又可單獨地作為控制糖尿病的藥物。

在人胰島素原的重組DNA生產中，產物通常在水溶液中處理并且凍干為非結晶粉。如果能用其它方法獲得結晶形式的人胰島素原，便可在貯藏性能、配方設計及其分離純化方法等方面提供許多方便。

本發明涉及新的結晶形式的人胰島素原及其生產方法。

因此，本發明涉及一種人結晶胰島素原，它包含一種人胰島素原和二價鋅離子的配合物的鹽，該鹽的陽離子可選自鋰、鈣、鈉、鉀、銨、鎂和鋇這類離子。

本發明還涉及生產上述鹽的方法，該方法包括：

（a）制備含約5-50毫克/毫升人胰島素原、含約0.1-5毫克/毫升酚物質、含約0.03-0.6毫當量/毫升一種其陽離子選自鋰、鈣、鈉、鉀、銨、鎂和鋇的陽離子鹽和含約02-5毫當量鋅離子的含水混合物;

（b）調節該含水混合物的PH至約5.4-6.5;

（c）使晶體生成;和

（d）從含水混合物中回收人結晶胰島素原。

如上所述，本發明是涉及人結晶胰島素原及其生產方法。

本發明的人結晶胰島素原包含一種人胰島素原和二價鋅離子的配合物的鹽。通常用人胰島素原六聚物形式來表示該配合物，該六聚物是由六個人胰島素原分子和2個鋅離子配價鍵聯的。其陽離子是一價的陽離子或二價的陽離子，可以是鋰、鈣、鈉、鉀、銨、鎂和鋇離子中之一種，較好的陽離子是鈣、鈉、鉀、銨或鎂離子，更好的陽離子是鈉、鈣或銨離子，最好的陽離子是鈣或鈉離子。

生產本發明人結晶胰島素原有許多重要的參數和條件。它們是：人胰島素原的濃度;酚物質的存在和濃度;陽離子的存在，含量和性質;鋅離子的存在和含量;及PH值。

以水為介質的人胰島素原的濃度通常為約5-50毫克/毫升，較佳的濃度范圍是低于上述濃度范圍的一半，更好的濃度范圍依次為約5-25毫克/毫升;約10-20毫克/毫升;及約13-17毫克/毫升，實施該方法所用的人胰島素原的最適宜濃度約為15毫克/毫升。

本發明方法采用一種酚物質。它可以是各種通用的酚。作為這類酚的例子有酚本身、鄰甲酚、間甲酚、對甲酚、間苯二酚、對羥基苯甲酸甲酯、鄰苯二酚等，較佳的酚物質是酚或甲酚。將含量約為0.1-5毫克/毫升的酚物質加入水結晶混合物中，酚物質的較佳含量約為1-3毫克/毫升。

人結晶胰島素原的陽離子可為上述各種陽離子中之任一種，它可以各種鹽的形式加入含水混合物中，不過，所用的鹽最好是鹽酸鹽。由于碳酸氫根離子的出現會抑制人胰島素原鹽的結晶等原因，因此，最好避免使用碳酸氫鹽。被選用的陽離子按陽離子：人胰島素原的摩爾比約為10∶1-1500∶1的用量加入水介質中。當然，當陽離子為二價離子（Ca⁺⁺、Mg⁺⁺、Ba⁺⁺）時，通常加入的陽離子的量要低于陽離子為一價離子（Na⁺、K⁺、Li⁺、NH⁺₄）時的量。一般，當陽離子為二價陽離子時，混合物中陽離子與人胰島素原的比率約為50∶1，陽離子為一價離子時，比率為200∶1。

一般來說，過量的、高濃度的陽離子會延遲結晶，所以人胰島素原的濃度以約13毫克/毫升或以下為宜。

本發明人結晶胰島素原是采用可溶性鋅鹽形式，典型的這類可溶性鹽有氯化鋅、乙酸鋅、硝酸鋅等。本發明結晶形式的人胰島素原所需的鋅離子的化學計量為每3個人胰島素原分子配一個鋅原子。本發明方法雖可采用較低的鋅離子含量，結晶雖仍會發生，但收率相應地降低。

因此，以化學計量表示的所用鋅鹽的量通常至少為化學計算量（1Zn⁺⁺/3HPI），也可高達約每個人胰島素原分子配2個Zn⁺⁺的摩爾比。結晶過程最適宜的鋅離子濃度約為每2個人胰島素原分子配1個鋅離子下進行。

欲制備含各所需量的人胰島素原、酚物質、陽離子和鋅離子的含水混合物，宜于在約PH3.5以下或最好在約6.5以上進行。

完全的混合物一旦制成，即調PH至約5.4-6.5，最好使PH維持在約5.8-6.3的范圍內，約6.0-6.1更好。

維持溫度于約0℃-40℃下，使晶體從混合物中生成。如所預料一樣，結晶最好在上述溫度范圍的低限例如約5℃-25℃下進行。如先于約25℃，再于約5℃，通過攪拌混合物，更可加速結晶過程。