[其他]克隆限制修飾系統(tǒng)的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87104039
• 申請(qǐng)日: 1987-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN87104039A
• 公開（公告）日: 1988-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 瓊·埃蘭·布魯克斯;金伯利·安·哈瓦德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新英格蘭生物實(shí)驗(yàn)室公司
• 主分類號(hào): C12N15/00
• 分類號(hào): C12N15/00;C12N9/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部
• 代理人: 李瑛,顧柏棣

1、一種克隆限制修飾系統(tǒng)的方法，該方法包括修飾基因引入克隆載體使其在適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞內(nèi)表達(dá)，將限制基因引入到含修飾基因的宿主細(xì)胞內(nèi)。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將修飾基因引入克隆載體并在適當(dāng)宿主細(xì)胞中表達(dá)。具體步驟包括：

（a）從含有用作克隆的限制修飾系統(tǒng)的材料中提純DNA，

（b）至少部分消化提純的DNA使其形成DNA片段，

（c）連接DNA片段到克隆載體上，

（d）用步驟（c）的克隆載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞以建立庫，

（e）從庫中篩選含有修飾基因的克隆，和

（f）培養(yǎng)含有步驟（e）中克隆的宿主細(xì)胞。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中在篩選后和培養(yǎng)前將限制基因引入宿主細(xì)胞。

4、根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中從含有限制修飾系統(tǒng)的細(xì)菌或病毒中選擇DNA來源。

5、根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中克隆的載體是質(zhì)?；虿《綝NA分子。

6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中質(zhì)粒為pBR322、pUC8、pUC9、pUC18、或pUC19。

7、根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中將限制基因引入宿主細(xì)胞，包括將限制基因引入次級(jí)質(zhì)粒，該質(zhì)粒是與含修飾基因的質(zhì)粒一致的，而后用次級(jí)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。

8、根據(jù)權(quán)利要求1到6中任一項(xiàng)所述的方法，其中將限制基因引入宿主細(xì)胞，包括將限制基因?qū)牒行揎椈虻馁|(zhì)粒。

9、根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中宿主細(xì)胞所采用ER1467，K802、HB101、RR1、K803或MM294。

10、生產(chǎn)限制酶的方法，該方法包括如上述任一權(quán)利要求所述的克隆方法和從培養(yǎng)物中回收限制酶。

11、按照上述任一權(quán)利要求所述方法生產(chǎn)的克隆。

12、權(quán)利要求11所述的克隆，其中被克隆的系統(tǒng)包括DdeⅠ限制修飾系統(tǒng)。

13、根據(jù)權(quán)利要求11所述的克隆，其中被克隆的系統(tǒng)包括BamHⅠ限制性修飾系統(tǒng)。

14、被克隆的BamHⅠ核酸內(nèi)切酶基因。

15、用權(quán)利要求14的克隆轉(zhuǎn)化的宿主。

16、被克隆的DdeⅠ核酸內(nèi)切酶基因。

17、用權(quán)利要求16的克隆轉(zhuǎn)化的宿主。