[其他]聚脫氧核苷酸的制備工藝

無效

• 申請號: 87103688
• 申請日: 1987-04-17
• 公開（公告）號: CN87103688A
• 公開（公告）日: 1988-01-20
• 發明（設計）人: 吉安弗朗科·菲得利;吉尤薩普·迪亞曼蒂尼;馬里薩·曼托瓦尼;吉尤薩普·普里諾
• 申請（專利權）人: 克利諾斯農場生物工業聯合股票公司
• 主分類號: C07H21/04
• 分類號: C07H21/04
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 李瑛

1.一種由原核酸溶液生產聚脫氧核苷酸Defibrotide的方法，上述溶液至少基本上沒有多糖和蛋白質，上述方法包括：

(1)通過原核酸的穩定聚合形成高聚合切口的聚脫氧核苷酸，如果需要，溶液將調節到至少1摩爾預定值離子力并調節溶液PH值，直到達到最大可逆增色性為止；????

(2)將所得到的溶液加熱至上述聚脫氧核苷酸的解聚溫度，從而解聚聚脫氧核苷酸直到溶液的可逆增色性在h＝15±5數值為止，h值由在天然DNA的百分比測量，并維持溶液在解聚溫度直到獲得上述可逆增色值；????

(3)停止解聚反應，斷裂在解聚溶液中存在于任何雙絲碎片中的氫鍵，以形成聚脫氧核苷酸的單絲碎片；以及

(4)將所得到的溶液加熱到某一個比解聚反應更高的溫度及PH值以穩定得到的聚脫氧核苷酸的單絲碎片以防止氫鍵重新形成。

2.根據權利要求1的方法，其中上述原核酸溶液由器官組織和哺乳動物細胞獲得。

3.根據權利要求1的方法，其中步驟1的實施是將堿金屬的水溶性鹽加入到上述原核酸的不溶性鹽懸浮液中以溶解該核酸，除去所得懸浮液中不溶解的陽離子，連續地加入水溶性鹽直到獲得至少1摩爾原核酸的鹽溶液。

4.根據權利要求3的方法，其中連續加入水溶性鹽直到上述原核酸的鹽溶液至少是3摩爾。

5.根據權利要求3的方法，其中堿金屬的水溶性鹽選自鹵化物和乙酸鹽。

6.根據權利要求5的方法，其中所說鹽為氯化鈉。

7.根據權利要求6的方法，其中所說鹽是3摩爾氯化鈉溶液。

8.根據權利要求3的方法，其中通過連續補充鹽水溶液，用切向流過濾膜在恒容條件分離過濾，以除去不溶性陽離子。

9.根據權利要求1的方法，其中上述過濾膜具有不高于??100000的分子限定范圍。

10.根據權利要求1的方法，其中用與可溶解鹽的陽離子相當的酸來調節步驟1的PH值，該可溶解鹽用于得到預定離子力的鹽溶液。????

11.根據權利要求10的方法，其中所說的酸是鹽酸。

12.根據權利要求11的方法，其中通過加入鹽酸使得溶液中的氫離子濃度與PH3-5相對應。????

13.根據權利要求1的方法，其中步驟2的解聚反應是在大約70到75℃的溫度下進行的。

14.根據權利要求13的方法，其中解聚反應是由測量可逆增色值來控制的，直到該增色值(以天然DNA中的百分比表示)為15±5為止。????

15.根據權利要求1的方法，其中在步驟3中用冷卻溶液的方法停止解聚反應。

16.根據權利要求1的方法，其中調節溶液PH值到大于7使步驟3的雙絲碎片中氫鍵斷裂。

17.根據權利要求16的方法，其中調節該溶液的PH值高于8。

18.根據權利要求16的方法，其中PH值用加入堿金屬的氫氧化物來調節。

19.根據權利要求18的方法，其中上述堿金屬氫氧化物是氫氧化鈉。

20.根據權利要求1的方法，其中將從步驟3得到的溶液加熱到至少比解聚反應溫度高5℃的溫度以穩定單絲碎片。

21.根據權利要求20的方法，其中加熱過程至少要進行30分鐘。????

22.根據權利要求1的方法，其中將從穩定加熱步驟4得到的溶液進行熱過濾，然后仍在加熱的條件下除去溶液中存在的任何鹽。

23.根據權利要求22的方法，其中溶液在除去上述鹽后濃縮。

24.根據權利要求22的方法，其中由熱過濾步驟得到的溶液通過切向流薄膜進行透析。

25.根據權利要求1的方法，其中在步驟1用1摩爾濃度的乙酸鹽緩沖液達到與體系的最大可逆增色值相應的最終期望PH值。

26.根據權利要求25的方法，其中將穩定加熱單絲碎片得到的溶液過濾并加入醇溶劑使最后產物沉淀。

27.根據權利要求26的方法，其中上述溶劑是乙醇。