[其他]細胞熔合裝置

無效

• 申請號: 86108459
• 申請日: 1986-12-11
• 公開（公告）號: CN86108459A
• 公開（公告）日: 1987-07-29
• 發明（設計）人: 望月崇孝;戶田健三;古賀守;十川好志;高山慎一郎;今井克行
• 申請（專利權）人: 株式會社島津制作所
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 李強

本發明涉及通過施加電激勵熔合細胞的裝置。

一般地，該裝置包括圍在一對分開的電極周圍的腔室，在上述電極之間置有含兩種不同的待熔合細胞的懸浮液，電激勵源，通過電極向細胞施加電激勵的裝置，和用于控制加給細胞的電激勵的控制器。

以交流（AC）場和直流（DC）脈沖作為電激勵，而用一對線或平面電極作為電極。

為使細胞熔合，首先通過電極向懸浮在置于電極之間的溶液中的細胞施加AC電場以使相鄰的細胞表層緊密接觸，然后將相當高的電場的DC脈沖加到所述細胞上將它們熔合到一起。

如果使用一對線電極，會遇到如下問題：

（1）在電極間的電場強度不均勻，因此要精確地知道到細胞上的電場的有效強度是困難的。

（2）熔化的細胞附著在電極上，所以當將它們從電極上分開時，它們會被損壞或斷開。

（3）發生多重熔合，即，三或更多的細胞象珍珠鏈似地連著。

我們還已知道使用在一對平行平板電極上施加DC電壓以熔合填在電極間的細胞的裝置，在這種裝置中，除了上面的問題（2）和（3）之外，還存在第三個問題：相鄰細胞間的表層接觸程度低，所以熔合速度低。

所以，本發明的一個目的是提供用于熔合細胞的裝置，它可提供相當均勻的場強，這對細胞熔合是重要因素，所以可以精確知道加到待熔合的細胞上的電場的有效強度，并且在其中細胞不附著到電極上，而在電極間相互緊密接觸，由此實現單對細胞的熔合而不至造成在許多細胞熔合在一起的多重熔合。

待熔合細胞懸浮在溶液中，而懸浮液放在熔合室中相對的電極對之間的空間中。如果懸浮液的量較少，如0.05ml，則小電極就可滿足，且包圍電極的腔室可以為簡單的形狀和結構，所以操縱腔室就相對容易。

然而，如果細胞懸浮液的量較多，如1ml，則電極間的空間和/或電極的線度必須增加以容納懸浮液。如果電極間的空間增加，加到電極上的電壓必須增加，并導致整個裝置尺寸的增加。如果電極的線度增加，為了使有限大小的熔合室容納增長的電極，該電極必須為復雜的形狀。如果用大尺寸電極，腔室必須增大，使裝置操作變得困難。

所以，本發明的另一目的是提供小型、并結構簡單并能容納足夠含待熔合細胞的懸浮液的熔合室。

通常，當施加電激勵熔合細胞時，需要30分鐘達到完全熔合。在此過程中，環境溫度和所加電場造成細胞懸浮液的溫度增高。從而出現蒸發，造成細胞懸浮液的滲透壓增加，并引起細胞的破壞。

所以，本發明的又一目的是提供可防止細胞懸浮液過量蒸發和減少的熔合室。

簡單地說，本發明的裝置包括在其中熔合細胞的熔合室，交流（AC）和直流（DC）電壓源，和用于有效地選擇加到熔合室中的細胞懸浮液上的AC場和DC脈沖的控制器。

該熔合室包括一對具有相互離開一定距離的相對表面的電極，以及在電極間的空間中放著的細胞懸浮液。針對細胞懸浮液中細胞的大小，電極的相對表面具有適當的垂直線度或高度，以防止主要在相鄰電極的上緣處很不均勻的電場對細胞的熔合所起的不利影響。電極間熔合室的表面由適當材料制成或得到拋光以提供平滑的表面。

在本發明的一個實施方案中，電極包括一對相互分開一定距離的平行平板電極。

在本發明的另一個實施方案中，電極包括一對中空柱狀電極，它們具有較短的軸長并共軸安置，使外面的電極具有與里面的電極的外表面相對的內表面。兩個電極的半徑互相接近，以產生象平行平板電極所產生的那樣的很均勻的電場。

在本發明另一實施方案中，熔合室具有用來容納細胞懸浮液的腔和用于容納不同液體的分離腔，并由頂或蓋密封以避免細胞懸浮液的液體組分的過量蒸發。

本發明將參考附圖作詳細描述。

圖1是本發明的一個實施方案的示意圖;

圖2是圖1中所示的熔合室沿線Ⅱ-Ⅱ的縱向剖視圖;

圖3是取掉頂蓋的另一形式的熔合室平面頂視圖;

圖4是圖3中用頂蓋密封的熔合室的沿線Ⅳ-Ⅳ的垂直剖視圖;

圖5是第三種形式的熔合室的透視圖;

圖6是圖5所示熔合室沿線Ⅵ-Ⅵ的垂直剖視圖;

圖7是圖5和圖6所示的熔合室的改進形的平面頂視圖;

圖8是圖7所示的熔合室沿線Ⅷ-Ⅷ的垂直剖視圖。

需要說明，在圖中各組成部分的相對尺寸未精確顯示，且為清楚描述而放大了，各部分的尺寸不能在任何意義上用來限制本發明的范圍。

參考圖1和2，在此顯示了用來熔合細胞的裝置，它包括熔合室10，和電源12及控制器14。