[其他]利用啤酒酵母基因BAR1分泌異種蛋白的方法

無效

• 申請號: 86107554
• 申請日: 1986-10-25
• 公開（公告）號: CN86107554A
• 公開（公告）日: 1987-08-26
• 發明（設計）人: 維維安·L·麥凱
• 申請（專利權）人: 維維安·L·麥凱
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P21/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金

1、一種DNA構建體，其特征在于它包括一部份啤酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)BRA1基因，其中包括該基因信號肽的編碼序列，至少一個對于所選擇的宿主來說的外來結構基因及一個啟動子、該啟動子在用所述DNA轉化的所述宿主中控制一種融合多肽或由所述部份BAR1基因及所述結構基因編碼的蛋白的表達。

2、根據權利要求1的構建體，其中所述融合多肽或蛋白包括一個KEX??2后加工位點。

3、根據權利要求2的構建體，其中所述BAR1基因的所述信號肽編碼序列已被改變，以降低融合多肽或蛋白的信號肽酶的裂解效率。

4、根據權利要求1的構建體，其中所述啟動子是一種酵母糖酵解途徑基因的啟動子。

5、根據權利要求1的構建體，其中所述啟動子是從啤酒酵母BAR1啟動子、啤酒酵母乙醇脫氫酶Ⅰ啟動子和梨酒酵母（Schizosaccharomycls??pombe）乙醇脫氫酵啟動子中選擇出來的。

6、根據權利要求5的構建體，其中所述構建體是pZV30、pZV31、pzV49和pZV50中選擇出來的。

7、根據權利要求1的構建體，它進一步包括啤酒酵母磷酸丙糖異構酶基因的轉錄終止區。

8、根據權利要求1的構建體，其中所述部份所述BAR1基因進一步包括鄰接轉錄起始位點的5′端非轉錄區的680堿基對的序列。

9、一種含有根據權利要求1-8中任一項的構建體的轉化細胞。

10、根據權利要求9的轉化細胞，其中所述細胞是真菌細胞。

11、根據權利要求10的細胞，其中所述真菌是啤酒酵母。

12、根據權利要求10的細胞，其中所述真菌是梨酒酵母。

13、根據權利要求10的細胞，其中所述真菌是曲霉菌（Aspergillus）或脈胞菌（Neurospora）。

14、一種在轉化細胞中生產異種蛋血和將所述蛋白引向細胞分泌途徑的方法，其特征在于該方法包括下列步驟：

（a）用DNA構建體轉化一種宿主細胞、該DNA包括一部份啤酒酵母BAR1基因，其中至少包括信號肽編碼序列、編碼所述異種蛋白的結構基因及啟動子、該啟動子在所述細胞中控制包括所述信號肽和所述異種蛋白的融合蛋白的表達。

（b）在適于為生產所述融合蛋白進行選擇的生長條件下，培養步驟（a）中所述的細胞。

15、根據權利要求14的方法，其中所述細胞是真菌細胞。

16、根據權利要求15的方法，其中所述真菌是啤酒酵母。

17、根據權利要求15的方法，其中所述真菌是梨酒酵母。

18、根據權利要求15的方法，其中所述真菌是曲霉菌或脈胞菌。

19、根據權利要求14的方法，其中所述融合蛋白包括一個KEX2后加工位點。

20、根據權利要求19的方法，其中所述BAR1基因的所述信號肽編碼序列已被改變、以降低多肽或蛋白的信號肽酶的裂解效率。

21、根據權利要求14的方法，其中所述啟動子是從啤酒酵母BAR1啟動子、啤酒酵母乙醇脫氫酶Ⅰ啟動子和梨酒酵母乙醇脫氫酶啟動子中選擇出來的。

22、根據權利要求14的方法，其中所述啟動子是酵母糖酵解途徑基因的啟動子。

23、根據權利要求22的方法。其中所述DNA構建體是從pZV30、pZV31、pZV49和pZV50中選擇出來的。

24、根據權利要求14的方法，其中所述異種蛋白從所述細胞中被輸出。

25、根據權利要求14的方法，其中所述蛋白包括胰島素原或胰島素。

26、一種根據權利要求14的方法所產生出來的蛋白質。

27、一種根據權利要求14的方法生產出來的蛋白質，它包括人胰島素原或胰島素的氨基酸序列。