[其他]制備新的耐熱的轉(zhuǎn)葡糖苷酶方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86106322
• 申請(qǐng)日: 1986-09-19
• 公開（公告）號(hào): CN86106322A
• 公開（公告）日: 1987-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 約翰·江百郡;小奧雷斯蒂·約翰蘭特羅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 邁爾斯實(shí)驗(yàn)室公司
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12P9/18;//;C12R1645)
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

本發(fā)明是關(guān)于從Talaromyces????duponti中制備轉(zhuǎn)葡糖苷酶的新方法。該轉(zhuǎn)葡糖苷酶，十分耐熱，能用于把麥牙糖轉(zhuǎn)化成4-α葡糖基麥牙糖和異麥牙糖。

轉(zhuǎn)葡糖苷酶（也已知為1，4-α-D-葡聚糖-6-α-D-葡糖（基）轉(zhuǎn)移酶和轉(zhuǎn)葡糖基酶）已從各種微生物中獲得。這是一種酶，它能從麥牙糖中由鍵裂和鍵的形成而引起三糖酶4-α-葡糖基麥牙糖和二糖異麥牙糖的形成。這些低聚糖是不發(fā)酵的，故能用于食品、軟質(zhì)飼料和其它工業(yè)，也用于新食品配制上。例：參閱Nunokawa等，日本專利號(hào)Sho.56（1981）-27236。他們敘述了一種方法，該方法是用Aspergilluo????Sairoi或A.Vsami培養(yǎng)的一種菌株生產(chǎn)轉(zhuǎn)葡糖苷酶和葡糖淀粉酶。培養(yǎng)物濾液是被經(jīng)過一個(gè)保留轉(zhuǎn)葡糖苷酶的樹脂貯存柱，同時(shí)葡淀粉酶進(jìn)入流出液。于是轉(zhuǎn)葡糖苷酶和乙酸緩沖液，pH5.5，便一起從樹脂中被去除。同樣，Pazur等在“一種霉菌的轉(zhuǎn)葡糖基酶的作用方式和分離中”，摘自生化和營養(yǎng)料，Nebraska、Lincoln、Nebraska等大學(xué)，生物化學(xué)和生物物理的案卷保管處，93卷，43-49（1961）頁中，敘述了一種方法來獲得Asperqillus????Niger的轉(zhuǎn)葡糖基酶，包括在二乙氨基乙基纖維素、淀粉和羧甲基纖維素上，用色譜和吸附法，從其它共同生成的糖酶中來分離這種酶。

另一方面，Tamura等在美國專利號(hào)4，247，637中，敘述了一種從Talaromyces????duponti菌株中生產(chǎn)耐熱的葡糖淀粉酶方法，包括，在一種營養(yǎng)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)菌株和分離酶。當(dāng)它們培養(yǎng)出菌株和用過濾去除菌類之后，把它們通過有活性粘土的濾液，并能在流出液中找到葡糖淀粉酶。

即使不去識(shí)別Tamura等所提的一切，也不去管一種十分耐熱的轉(zhuǎn)葡糖苷酶，Talaromyces????duponti也會(huì)分泌出轉(zhuǎn)葡糖苷酶。

同樣，現(xiàn)在科學(xué)家們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在一種適當(dāng)營養(yǎng)介質(zhì)中，培養(yǎng)Talaromyces????duponti細(xì)胞，便能制備出耐熱的轉(zhuǎn)葡糖苷酶。

本發(fā)明提供了一種制備轉(zhuǎn)葡糖苷酶的方法，包括在一種適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)生長介質(zhì)中，培養(yǎng)Talaromyces????duponti的菌株和分離轉(zhuǎn)葡糖苷酶。本發(fā)明也提供了由T.duponti一種真菌生成的轉(zhuǎn)葡糖苷酶。

本發(fā)明是專門關(guān)于從真菌類T.duponti中獲取轉(zhuǎn)葡糖苷酶的酶。這種酶是，在這種微生物的一種營養(yǎng)生長介質(zhì)中，由發(fā)酵生成。這種酶在發(fā)酵過程中被分泌出來之后，生物量可用任何一種液體或固體分離技術(shù)來從發(fā)酵液體培養(yǎng)基中去除，如：過濾法或傾析離心法來得到一種含酶溶液。

一般來講，凡是能用于培養(yǎng)一般霉菌的介質(zhì)都可用來作為T.duponti發(fā)酵的營養(yǎng)源。各種炭源是眾所皆知的，它們可選自淀粉、糖蜜、糠米等等。氮源也是一般皆知的，諸如：大豆、棉花籽、胨、玉米漿、酵母膏等等。硫酸鹽或氯化物鹽也被用于發(fā)酵介質(zhì)，如：硫酸鎂、氯化鈣、氯化鈉和氯化鉀。磷酸鹽也常被應(yīng)用因?yàn)樗鼈兂？捎米骶彌_劑。另外，發(fā)酵的pH值是可以調(diào)節(jié)的，最好是很接近中性的范圍，用的堿如：氫氧化鈉或氫氧化鉀;用的酸如：鹽酸或醋酸。

pH的條件、時(shí)間和溫度，在培養(yǎng)霉菌的工藝上是從所皆知的，pH必須是在約3-9的范圍內(nèi)，最好在約5-8的范圍內(nèi)。培養(yǎng)介質(zhì)的一種很佳的pH是十分接近中性。發(fā)酵可在任何地方進(jìn)行，大致為2天至10天，最好是約4天至8天。溫度必須是在約25℃-50℃之間，最好是在30℃-45℃之間。最合適的生長溫度是介于40℃左右。

凡屬于生成轉(zhuǎn)葡糖苷酶的Talaromyces????duponti類的真菌都能用于本發(fā)明。在一個(gè)很佳的實(shí)施例中，所用的T.duponti菌株是貯存在發(fā)酵研究院，工業(yè)科技所，西巴城，日本，在FRI登記，登記號(hào)為4566。人們意外地發(fā)現(xiàn)，由這種特殊真菌的菌株生成的轉(zhuǎn)葡糖苷酶是特別嗜熱的，這可從下例見到。FRI4566突變型菌株也能應(yīng)用。Talaromyces????duponti的鑒定，在“嗜熱的真菌”一書中由Cooney和Emerson進(jìn)一步闡述;“在Trans.Mycol.Soc.，”日本，第14卷中由Awao和Mitsuqi闡述。另外，在美國專利4，247，637中也詳細(xì)地引證了這種菌株和它的繁殖。