[其他]制備豬支原體的重組表面抗原及其疫苗的方法

無效

• 申請號: 86102858
• 申請日: 1986-03-26
• 公開（公告）號: CN86102858A
• 公開（公告）日: 1987-10-28
• 發明（設計）人: 海因茨·E·沙勒;莫·奎·克林克特
• 申請（專利權）人: 拜奧根公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/00;C07K7/04;A61K37/02;A61K39/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

本發明是關于豬支原體表面抗原;涉及以重組DNA的方法制備該抗原：在此抗原的基礎上，制備豬支原體疫苗的方法;關于用此疫苗防治豬地方性獸病肺炎的處理方法，此外，在此抗原或此抗原的抗體的基礎上，本發明還涉及用以發現豬群中豬支原體感染的診斷方法。

豬肺炎支原體（Mycoplasma????hyopneumoniae）是豬地方性獸病肺炎的病原，造成世界范圍內豬的重要疾病。該病為慢性過程，非致命性疾患，各年齡組的豬都可得病，受感染的豬僅有輕度咳嗽和發燒的癥狀。但此種感染的經濟影響是很大的，因為實際進食的減少，體重增加的減低，成為市場上的小個兒豬，致使蒙受重大經濟損失。迄今，用疫苗控制此病或建立隔離病原豬群的努力尚未獲得成功。

支原體與宿主細胞表面的物理性連接，是地方性獸病肺炎持久存在與發展的基礎。如今在檢定出豬肺支原體的媒介貼附宿主細胞的表面蛋白組分及其在感染過程中刺激自然生成抗體的基礎上，提出抗地方性獸病肺炎的疫苗和對地方性獸病肺炎的診斷方法。

檢定出上述表面蛋白DNA順序編碼后，可用適宜的表地載體，組成重組DNA分子，并將此重組DNA分子將適宜的宿主轉化（例如，原核性或真核性宿主）。然后培養轉化宿主，使其表達DNA順序并制造出理想的支原體表面蛋白。

繼之，將產生和分離出的表面蛋白與其它活性成分或它們的組合物，給豬注射，給藥量應足夠刺激抗體的生成，從而提供一種免疫豬，抗豬肺炎支原體感染的方法。這種疫苗的有效載體和適宜的給藥方式，在獸醫技術操作中是人所共知的。

本發明的表面抗原也是用于創造檢測豬群中豬肺炎支原體感染診斷藥盒的基礎，例如，根據抗體檢出本發明表面抗原的道理，可用診斷藥盒在豬群中，每10或20個豬中抽取一個，常規地、經常地檢查支原體感染是否存在。檢查陽性，應對整個豬群用本發明的抗原盡早接種，以防止支原體的擴散。

本發明還關系于一些多肽和肽鏈，這些多肽和肽鏈是豬肺炎支原體細菌表面蛋白的一部分，當施用于豬時它們可刺激生成與豬肺炎支原體結合的抗體。

優選出的多肽選自：

NNNNEKKK;NNPESKSQDNANKGNYLSLNIGYRSFADKPDLLMVMMQSQKLYKNLVNRQLWLILSHKKQVKKECIENGQKIAKDLGE;

NSKMSLKNTEPNFFYGIYEKAIDKRFSLIDKIKI;

NSTVSETRDFIQKFQKFDIFYQENVGKIKEDLDFAIAPSFISLSLISKSLTKKLEIAAQNLSQFDSGAFTGEISGKMLQDLGTKYVI;和

NSGPVYGPFLPGEDKRELNPIVAKSANSITIDLNIITKTKLSERVAALSRVEF。

上述氨基酸編碼中，字母符號所代表的氨基酸如下：

F：苯丙氨酸????L：亮氨酸

I：異亮氨酸????M：蛋氨酸

V：纈氨酸????S：絲氨酸

P：脯氨酸????T：蘇氨酸

A：丙氨酸????Y：酪氨酸

H：組氨酸????Q：谷氨酰胺

N：天冬酰胺????K：賴氨酸

D：天冬氨酸????E：谷氨酸

C：半胱氨酸????W：色氨酸

R：精氨酸????G：甘氨酸

本發明還關系到重組DNA分子，用其制備上述肽鏈。以DNA順序為特征的優選的重組DNA分子選自：

GAACAACAACAATGAAAAAAAAGAAATAATGCGTGATTTTTTTGAAAAGGGAAGAAAAGGCCTTTTTTTATTACCAGTTATATGGCCCTCTTTTC;

AAATAATCCTGAATCAAAATCGCAAGCTAATGCAAATAAAGGAAATTATCTTTCTTTAAATATTGGTTATCGTAGTTTTGCTGATAAACCTGACTTGCTGATGGTTTTATTACAGTCCCAAAAGTTGGTAAAGAACTTAGTAAATCEACAATTATGGCTGATCCTGTCCCATAAAAAACAGGTAAAAAAAGAGGACATCGAAAACGGGCAAAAAATAGCAAAAGACCTTGGTGAA;

GAATTCAAAGATGAGTTTAAAAAATACTGAACCTAATTTTTTTGTCGGCATCTATGAAAAGGCAATTGATAAACGTTTTTCTTTGATAGATAAAATTAAAATCG;