[其他]克隆限制性基因和修飾性基因

無效

• 申請號: 86102277
• 申請日: 1986-03-01
• 公開（公告）號: CN86102277A
• 公開（公告）日: 1986-10-01
• 發明（設計）人: 杰弗里·格雷厄姆·威爾遜
• 申請（專利權）人: 新英格蘭生物實驗室公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 巫肖南

1、克隆限制性基因的方法，包括構成一個含有這種限制性基因編碼的DNA的庫，分離含有這種修飾性基因無性系和篩選含有修飾性基因又同時存在限制性基因的克隆。

2、根據權利要求1的方法，其中形成庫所用步驟：

（a）從含有這種限制性基因的來源中提純DNA，

（b）部份地消化已純化的DNA形成DNA片斷，

（c）把這種片斷連接到克隆載體上，

（d）用步驟（c）中的克隆載體轉化寄主細胞形成初級細胞庫，和

（e）純化來自初級細胞庫的重組載體形成初級載體庫。

3、根據權利要求2的方法，其中DNA的來源是含有限制性基因的細菌。

4、根據權利要求2的方法，其中克隆載體是一種質?；虿《綝NA分子。

5、根據權利要求4的方法，其中質粒是pBR₃₂₂。

6、根據權利要求4的方法，其中寄主細胞是E.coli的hsdR-株系。

7、根據權利要求1的方法，其中含有修飾性基因的克隆是通過用與修飾性基因相應的限制性酶完全消化庫以形成消化池，把該池再次轉化寄主細胞并選擇含修飾性基因的克隆來分離的。

8、根據權利要求2的方法，其中含有修飾性基因的克隆是通過用與修飾性基因相應的限制性酶完全消化載體庫以形成消化池，把該池再次轉化寄主細胞并選擇含修飾性基因的克隆來分離的。

9、根據權利要求8的方法，其中消化作用通過加入核酸外切酶或磷酸酯酶來補充。

10、根據權利要求8的方法，包括附加步驟：

（a）從這種消化池進一步形成一個載體庫，

（b）用限制性酶再次消化步驟（a）中的載體庫，以便形成一個消化池，和

（c）選擇含有從步驟（b）消化池中制備的那種修飾性基因的無性系。

11、根據權利要求10的方法，其中根據步驟（c）重復（a）和（b）步驟，以便促進選擇。

12、根據權利要求1的方法生產的無性系。

13、根據權利要求12的那種無性系，其中這種限制性基因為TaqⅠ編碼。

14、根據權利要求12的那種無性系，其中這種限制性基因為HaeⅡ編碼。

15、供生產限制性酶和/或其相應的修飾性酶的方法，包括步驟：

（a）從含有這種限制性基因的來源中提純DNA，

（b）部份消化這種已純化的DNA，以便形成DNA片斷，

（c）把這種片斷連接到克隆載體上，

（d）用步驟（c）中的克隆載體轉化寄主細胞，以便形成一個庫。

（e）通過用限制性酶進行完全消化的方法從庫中篩選含有相應于這種限制性基因的修篩性基因無性系。

（f）進一步篩選步驟（e）中同時存在限制性基因的無性系。

（g）培養步驟（f）中的無性系，和

（h）從這種培養物中回收這種限制性酶類和/或修飾性酶類。

16、根據權利要求15的方法，其中這種DNA的來源是含有這種限制性基因的細菌。

17、根據權利要求15的方法，其中這種克隆載體是質粒。

18、根據權利要求17的方法，其中這種質粒是pBR₃₂₂。

19、根據權利要求15的方法，其中這種寄主細胞是E.coli的hsd??R-株系。

20、根據權利要求19的方法產生限制性酶。

21、根據權利要求15的方法，其中所產生的這種限制性酶是HaeⅡ，而且其DNA的來源是埃及嗜血桿菌（Haemophilus??aegypt-uis）。

22、根據權利要求21的方法所產生的HaeⅡ。

23、根據權利要求21的方法所產生的M.HaeⅡ。

24、根據權利要求15的方法，其中所產生的這種限制性酶是TaqⅠ，而且DNA的來源是水生棲熱桿菌（Thermus??aquaticus）。

25、根據權利要求24的方法所產生的TaqⅠ。