[其他]瘧疾疫苗的制備方法

無效

• 申請號: 86100979
• 申請日: 1986-02-07
• 公開（公告）號: CN86100979A
• 公開（公告）日: 1986-12-17
• 發明（設計）人: 米切爾·斯圖爾特·格羅斯;詹姆斯·韋朗西斯·揚
• 申請（專利權）人: 史密絲克萊恩貝克曼公司
• 主分類號: A61K39/015
• 分類號: A61K39/015;A61K37/02;//;3907)
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金

瘧疾是常見的重癥，雖然多年已有廣泛的研究，但卻未開發其疫苗例如參見“科學”226卷679頁（1984年11月9日）。就實驗上而言，哺乳動物包括人類曾以經過光照之裂殖體免疫而保護對抗瘧疾病原一瘧原蟲的感染。Clyde等人Am.J.Trop.Med.Hyg.，24卷397頁（1975）及Rieckman等人Bull，WHO，57卷（Supp.1）261頁（1979）。及良田等人“科學”207卷71頁（1980）報告：此種保護作用至少部分經由針對裂殖體表面上的蛋白質一裂殖體周圍（CS）蛋白質其抗體所媒介。對抗CS蛋白質誘出的單源抗體可於活體外中和感染能力并於活體內保護動物。CS蛋白質在演化上顯然可高度保留於種屬內，但各種屬間又有相當大差異。

已知有四種瘧原蟲可感染人體：鐮狀、間日、卵圓及四日瘧原蟲，后二者出現頻度遠為低。其它科學上感興趣的種屬有伯吉瘧原蟲（P.berghei）及諾里西瘧原蟲（P.knowlesi），而其宿主分別為嚙齒類及猴類。

諾里西瘧蟲的CS蛋白質含有12個氨基酸序列的12個銜接重復段。Zavala等人J.Exp.Med.，157卷1947頁（1983）報告：重復單位為諾里西瘧蟲的主要免疫原，是基于實驗顯示：對重復單位的單源抗體可阻止抗一裂殖體抗血清接近已溶解的裂殖體蛋白質。Gysin等人J.Exp.Med.，160卷935頁（1984）報告代表諾里西瘧蟲CS蛋白質銜接重復單位合成的24殘基肽可中和毒力裂殖體對猴類的咸染能力。

Colman等人WO84-2922-A（1984年8月2日出版）報告選殖諾里西瘧蟲CS蛋白質重復單位的部分編號區，及在大腸桿菌體內表現其β-內醯胺酶及β-半孔糖苷酶融合體。Nussenzweig等人美國4，466，917揭示稱為P44蛋白質的裂殖體蛋白質及其在大腸桿菌體內的選殖及表現。

Enea等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA81卷7520頁（1984）報告在西諾瘧蟲（P.cynomlolgi）CS蛋白質內有類似重復單位結構。

Kemp等人WO.84-02917-A揭示鐮狀瘧蟲c????DNA在大腸桿菌體內之選殖及表現。

Dame等人“科學”，225卷593頁（1984）報告鐮狀瘧蟲CS蛋白質在大腸桿菌體內的選殖及表現。蛋白質描述為包含約412氨基酸，分子量約為44，000;包含41個四肽銜接重復段-系從與針對CS蛋白質誘生的單源抗體結合的重復區衍生而得的合成的7-，11-及15-殘基肽。

一方面，本發明為可賦予哺乳動物對抗鐮狀瘧原蟲感染的免疫能力的免疫原多肽，刨含鐮狀瘧蟲CS蛋白質4或4個以上銜接重復單位。

另一方面，本發明為保護人不受鐮狀瘧原蟲裂殖體感染的疫苗，包含免疫保護用量的本發明多肽及藥用合格載劑。

附圖的簡單說明

圖1a為攜有CS蛋白質編碼序列的鐮狀瘧蟲基因組DNA之一區的部分鑒識內核酸酶切割拼圖。

圖1b為pAS1部分鑒識內核酸酶切割拼圖。

本發明的多肽包含4或多個在大腸桿菌體內產生的銜接CS蛋白質重復單位。非CS蛋白質，唯包含CS蛋白質的非重復單位部分。鐮狀瘧蟲重復單位為四肽，其序列如下：

天冬素（asn）-丙氨酸（ala）-asn-脯氨酸（pro）-。

本發明多肽內，可存在有四肽變化，規定不可對其抗體與鐮狀瘧蟲CS蛋白質的反應性有顯著不良影響;舉例來說，如Dame等人“科學”225卷593頁（1984）所揭示者（并入本文以資參照），天然鐮狀瘧蟲CS蛋白質的41四肽重復段中，有37段為asn-ala-asn-pro及4段為asn-纈氨酸（val）-天冬酸（asp）-pro。比較好的是，本發明多肽中的四肽重復單位有超過半數為所謂的常見序列-asn-ala-asn-pro。

較好的是，本發明多肽包含約8重復段（即32個氨基酸），至多約148重復段;更好的是，多肽包含約16至112重復段。

本發明多肽可為具有非CS蛋白質重復單位序列的混成體，亦即融合多肽。此種非CS蛋白質重復序列可作為載劑分子而促進免疫原性，及有助於在重組微生物體內選殖及表現。另外，如此額外序列可攜帶有1個或多個親和基而親和其他裂殖體免疫原，其他瘧原蟲免疫原及/或其他非瘧原蟲免疫原。本發明特別排除其外者為無法以實用量在大腸桿菌體內安定地表現的CS蛋白質，及對鐮狀瘧原蟲免疫不需要CS蛋白質。

本發明各型多肽的特殊具體例例示於本文者有：