[其他]用鏈球菌發酵制造高分子量透明質酸鈉的方法

無效

• 申請號: 86100913
• 申請日: 1986-01-18
• 公開（公告）號: CN86100913A
• 公開（公告）日: 1986-09-24
• 發明（設計）人: 阿布拉哈姆·尼姆羅德;本詹明·格林曼;多夫·卡納;莫施·蘭德斯伯格
• 申請（專利權）人: 生物工藝總公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/08;A61K31/725;//;C12R146)
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

1、獸疫鏈球菌微生物(Streptococcuszooepidemicus)HA-116ATCC39920號以及從中獲得突變體。

2、獲得透明質酸鈉的方法，該法包括在適宜的條件下，在適當的營養培養基中，在劇烈的攪拌下，培養獸疫鏈球菌屬微生物生長，該培養基中包含作為碳源的糖組分實際上不變的濃度約0.2到10克/升，實際上不變化pH值約6.5到7.5之間，實際上不變的鎂離子濃度約0.05克/升以上，這樣微生物生產透明質酸鈉并將它排泄到培養基中，然后從培養基中回收透明質酸鈉。

3、根據權利要求2的方法，其中微生物是獸疫鏈球菌。

4、根據權利要求3的方法，其中微生物是獸疫鏈球菌HA-116??ATCC??39920。

5、根據權利要求2的方法，其中所述的適當條件包括培養基曝氣，速度為每分鐘每單位體積培養基大于約0.5體積的空氣。

6、根據權利要求2的方法，其中適當的營養培養基包含以下的組分，濃度以克/升培養基計：

組分??濃度

酪蛋白水解液??約10-30

酵母提取物??約5-15

NaCl??約2

MgSO₄·7H₂O 約0.5以上

K₂HPO₄約2.5

葡萄糖??約2-15。

7、根據權利要求2的方法，其中透明質酸鈉的回收包括：處理含微生物的培養基，以便除去微生物和其它的不溶物，透明質酸鈉從培養基中沉淀，然后回收沉淀。

8、根據權利要求7的方法還包括該沉淀的磨碎和干燥。

9、根據權利要求7的方法還包括：調節含微生物的培養基的pH至約5.0，在除去培養基中的微生物之前在適宜的一段時間內將培養基加熱到80°-95℃。

10、根據權利要求9的方法，其中在約90℃加熱培養基約20分鐘。

11、根據權利要求9的方法，其中培養基在約80℃加熱培養基約40分鐘。

12、根據權利要求7的方法，其中的處理包括過濾。

13、根據權利要求12的方法，其中的過濾包括在硅藻土上進行的過濾。

14、根據權利要求7的方法，其中沉淀法包括在培養基中加入第一種有機溶劑，生成沉淀，該沉淀再溶解在3%醋酸鈉水溶液中，加入第二種有機溶劑生成沉淀，沉淀再溶解于3%醋酸鈉水溶液中，加入活性炭形成懸浮液，過濾懸浮液并在濾液中加入第三種有機溶劑生成透明質酸鈉沉淀。

15、根據權利要求14的方法，其中第一、第二和第三種有機溶劑各自是異丙醇、乙醇或丙酮。

16、根據權利要求15的方法，其中第一、第二和第三種有機溶劑都是異丙醇。

17、根據權利要求7的方法，還包括調節含微生物的培養基的pH到約7.0，冷卻培養基到約4°到15℃之間，在處理培養基除去微生物之前，用3%醋酸鈉水溶液稀釋培養基。

18、根據權利要求7的方法，還包括調節含微生物的培養基的pH到約7.0，培養基冷卻到4°到20℃之間，在處理培養基除去微生物之前，用3%醋酸鈉水溶液稀釋培養基。

19、根據權利要求14的方法，還包括調節含微生物的培養基的pH到約7.0，培養基冷卻到約4°到15℃之間，在處理培養基除去微生物之前用3%醋酸鈉水溶液稀釋。

20、根據權利要求19的方法，還包括將沉淀再溶解在0.15摩爾的NaCl水溶液中，加入氯化十六烷基吡啶鎓鹽，形成透明質酸的十六烷基吡啶鎓鹽，將該鹽溶解在NaCl水溶液和乙醇中（NaCl至少1摩爾），加入有機溶劑和回收透明質酸鈉。