[其他]乙型肝炎抗原組合物的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 85106376
• 申請(qǐng)日: 1985-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN85106376A
• 公開（公告）日: 1987-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阿爾弗里德·梅爾·普林斯;約翰·維尼克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 紐約血庫(kù)公司
• 主分類號(hào): A61K39/29
• 分類號(hào): A61K39/29
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發(fā)明是關(guān)于一種用作疫苗或疫苗中間體的溶液或粒子懸浮液。具體的講，本發(fā)明涉及帶有新型高效免疫粒子的乙型肝炎表面抗原（HBs????Ag）。本發(fā)明是關(guān)于該種粒子的制備過程及其用于例如人和黑猩猩類的動(dòng)物免疫抗乙型肝炎病毒的方法。

現(xiàn)在稱為乙型肝炎表面抗原（HBs????Ag）的東西與乙型肝炎病毒的關(guān)系許多年以前就被Alfred????M.Prince（Pro.Nat.Acad.Sci（U.S）60∶814-821，1968）所明確鑒定。該抗原主要位于嵌在顆粒大小約為18-24納米的酯蛋白顆粒膜上的蛋白質(zhì)表面以及具相似直徑的絲狀體上。現(xiàn)在已知其表現(xiàn)為類似膜的，包圍乙型肝炎病毒（HBV）顆粒的膜的碎片，亦知其為“戴恩”（Dane）顆粒。

此后，具有該種粒子的疫苗被Blumberg等人發(fā)表于美國(guó)專利第3，636，191號(hào)，以后，Prince和其他人發(fā)表了別的具有由戴恩顆粒和絲狀體得到的膜蛋白的乙型肝炎病毒疫苗。這些戴恩顆粒和絲狀體含有或結(jié)合有發(fā)現(xiàn)于慢性乙型肝炎病毒的許多攜帶者身上的乙型肝炎e抗原。

因?yàn)檫M(jìn)行了上述的工作，抗乙型肝炎病毒疫苗被引進(jìn)已有HBs????Ag顆粒的美國(guó)。該疫苗為酶解含有由慢性感染的HBV攜帶者的顆粒衍生出來(lái)的粒子的HBs????Ag而獲得，由前述美國(guó)專利第3，636，191號(hào)有此描述。本疫苗用昂貴的純化方法所制備，結(jié)果其免疫原性大部分喪失。結(jié)果是必須給予相對(duì)來(lái)說(shuō)大劑量的最終抗原（HBs????Ag）以得證足夠的免疫反應(yīng)。因?yàn)檫@些因素，所以該疫苗只能以相當(dāng)高的價(jià)格得到，大約每支30美元或更高。因?yàn)樾枰?dú)特的注射和兩種輔助劑，所以現(xiàn)在在美國(guó)約需花費(fèi)100美元以獲得抗乙型肝炎免疫，這樣的價(jià)格在世界上那些對(duì)這種疫苗的需求最大的地方是支付不起的。

因此，現(xiàn)已需要提供一種含有乙型肝炎表面抗原的乙型肝炎疫苗，該抗原以相當(dāng)純的形式存在，因而免疫原性大大地增強(qiáng)，所以可使用小得多的劑量而且花費(fèi)又不太昂貴。當(dāng)然，存在于起始血漿中的感染病毒已被完全滅活也是必需的，用以保證沒有感染的危險(xiǎn)。

乙型肝炎主要感染那些居住在亞洲和非洲的發(fā)展中國(guó)家的居民，在那里用于公共健康檢查的資金有限。在二十世紀(jì)，有義務(wù)提供這樣一種疫苗，用于那些被乙型肝炎病毒感染所威脅的，其結(jié)果是受到隨之而來(lái)的肝癌和肝硬化發(fā)展威脅的無(wú)數(shù)人們的預(yù)防，并以能付出的價(jià)格提供該疫苗。在發(fā)展中世界的許多國(guó)家里，需要使免疫必須花費(fèi)每人少于1美元。如果真要使用疫苗的話。

根據(jù)前述內(nèi)容，由本發(fā)明提供的疫苗或疫苗中間體包含具有乙型肝炎表面抗原（HBs????Ag）粒子，該抗原已經(jīng)基本上被轉(zhuǎn)化成具有新的在自然界從未被發(fā)現(xiàn)過其形態(tài)的形式，并具有人驚奇地提高了的免疫原性。本發(fā)明的疫苗的特征在于，含有以重量計(jì)少于5%的血清蛋白，除了辛酸鈉穩(wěn)定血清白蛋白以外，實(shí)際上最好是沒有血清蛋白質(zhì)。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用于使在純化后可能存留下的活病毒滅活的獨(dú)特的快速加熱方式，不但象黑猩猩試驗(yàn)所看到的那樣病毒被滅活了，而且大部分粒被轉(zhuǎn)化成新的形態(tài)的形式。它含有加熱之前不存在的15-30納米直徑的絲狀體形式。這些絲狀形式包括圖1和電子顯微圖所圖解說(shuō)明的新形態(tài)。這些形態(tài)包括直纖維，閉合環(huán)狀或環(huán)狀形纖維以及許多種類的分枝纖維。

一般說(shuō)來(lái)，含有以這樣希奇古怪的纖維狀結(jié)構(gòu)存在的粒子的HBs????Ag百分率用電子顯微鏡檢查在15-75%之間。以含有已經(jīng)轉(zhuǎn)化為新的纖維狀結(jié)構(gòu)粒子起過全部含有粒子50%的HBs????Ag為更好。

另外，本發(fā)明疫苗可以其制備方式來(lái)表示其特征。一般說(shuō)來(lái)，疫苗按下列步驟制備：

A.從血漿中沉淀HBs????Ag，例如，含有HBs????Ag的人血漿用聚乙二醇處理后，可從其中含有的其它血清蛋白質(zhì)中分離出HBs????Ag;

B.分離出的HBs????Ag在羥基磷灰石上負(fù)吸附，進(jìn)一步除去大部分血清蛋白;

C.這樣吸附的HBs????Ag等密度離心分離殘余的完態(tài)戴恩顆粒，并進(jìn)一步除去殘留的微量雜質(zhì)血清蛋白;

D.對(duì)離心分離出的粒子加熱使之熱滅活，濃度為0.5-10mg/ml，溫度101-104℃，2-5分鐘，然后冷卻熱粒子，例如將它們置于冰水浴中。