[其他]細菌多糖與免疫原蛋白共價結合物的制備方法

無效

• 申請號: 85104164
• 申請日: 1985-05-31
• 公開（公告）號: CN85104164A
• 公開（公告）日: 1987-02-04
• 發明（設計）人: 斯蒂芬·馬伯格;彼得·J·尼斯克恩;理查德·L·托爾曼
• 申請（專利權）人: 麥克有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;A61K39/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

1、把有酸性基團的細菌莢膜多聚糖和免疫原蛋白通過含如下式的硫醚鍵雙屬間隔基結合制備多聚糖-蛋白質結合物的方法，A-E-S-B其中E是，R是H或-CH₃；A是Y(CH₂)_nNH-；這m是0到4；n是0到3；W是0或NH；Y是CH₂，O，S，NR′或CHCO₂H；這里R′是H或C₁-或C₂-的烷基；如果Y是CH₂，那么m和n二者不能都為O或S，n也是大

該方法包括下列步驟：

(1)有酸性基團的細菌莢膜多聚糖通過下列步驟加溶：

(i)用大的疏水陽離子取代多聚糖的酸性基中的氫，生成多聚糖的鹽；然后

(ii)把多聚糖的鹽溶在不含水，極性的質子惰性溶劑；

(2)用一種雙功能試劑活化多聚糖；

(3)把這種活化的多聚糖與一個雙一親核試劑反應；

(4)把這已與一種雙-親核試劑反應了的活化的多聚糖與一種產生親電子部位的試劑反應，從而與側面親電子部位生成一種多聚糖。

(5)使免疫蛋白單獨地與一種產生硫醇基的試劑反應，與側面硫醇基生成一種蛋白；然后

(6)通過超速離心法把含有側硫醇基的蛋白中分子量低的硫醇除去；然后

(7)使具側面親電子部位的多聚糖與具側面硫醇基的蛋白質反應，生成一種多聚糖-蛋白質結合體，它是通過共價的硫醚鍵使二者連接的，然后

(8)把混合液離心，以除去非共價聯結的多聚糖和蛋白質。

2、根據權利要求1所述方法，其中所用具酸性基團的細菌莢膜多聚糖是從流感嗜血桿菌（Haemophilus??influonzae）b型多聚糖和肺炎球菌（Streptococcus??pnenmoniae）6B型，19F型和23F型多聚糖中選擇的。

3、根據權利要求1所述方法，其中所用免疫原蛋白是腦膜炎雙球菌B血清型外膜蛋白或麻仁球蛋白。

4、根據權利要求1所述方法，其中所用含酸性基團的細菌莢膜多聚糖是流感嗜血桿菌b型多聚糖，免疫原蛋白是腦膜炎雙球菌B血清型外膜蛋白，它們是通過下式雙屬間隔基聯結的：

5、根據權利要求1所述的方法，其中所用含酸性基團的細菌莢膜多聚糖是肺炎球菌6B型多聚糖，免疫原蛋白是一種腦膜炎雙球菌B血清型外膜蛋白，它們是通過下式雙屬間隔基聯結的：

6、根據權利要求1所述的方法，其中所用含酸性基團的細菌莢膜多聚糖是肺炎球菌19型多聚糖，免疫原蛋白是一種腦炎雙球菌B血清型外膜蛋白，它們是通過下列雙屬間隔基聯結的：

7、根據權利要求1所述方法，其中所用含酸性基團的細菌莢膜多聚糖是肺炎球菌23F型多聚糖，免疫原蛋白是一種腦膜炎雙球菌B血清型外膜蛋白。它們是通過下式雙層間隔基聯結的：

8、一種加溶含有酸性基團的多陰離子多聚糖的方法，它包括：

（1）用大的疏水陽離子代替多聚糖中酸性基團的氫，以使多聚糖呈鹽的形式，然后

（2）把以鹽形式的多聚糖溶在不含水的極性的質子惰性溶劑。

9、一種根據權利要求8所述的方法，其中大的疏水陽離子是從含有三或四（C-C）烷基-銨，1-氮雜雙環（2.2.2）辛烷和1，8-二氮雜雙環（5.4.0）十一烷-7-烯的一組物質中選擇的。

10、一種根據權利要求9所述的方法，其中的不含水的極性的質子惰性溶劑是從含有二甲基甲酰胺，二甲基亞砜，二甲基乙酰胺，甲酰胺和N，N′-二甲基咪唑啉酮的一組物質中選擇的。

11、一種根據權利要求9所述的方法，其中大的疏水陽離子是四-正-丁胺;而不含水，極性的質子惰性溶劑是二甲基甲酰胺。

12、一種共價修飾多陰離子多聚糖的方法，它包括：

（1）把多聚糖加溶到不含水，極性的質子惰性溶劑之中;

（2）用雙功能劑活化多聚糖，然后（3）把這個活化了的多聚糖與一個雙-親核試劑反應。