[發明專利]一株谷氨酸棒桿菌及其在發酵生產L-亮氨酸中的應用

有效

• 申請號: 202310849084.5
• 申請日: 2023-07-12
• 公開（公告）號: CN116590202B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 張天惕;周旭波;唐海靜;馬淑芳;高建國
• 申請（專利權）人: 歐銘莊生物科技（天津）有限公司濱海新區分公司;歐尚元智能裝備有限公司;歐銘莊生物科技（天津）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07C227/40;C07C227/42;C07C229/08;C12P13/06;C12R1/01
• 代理公司: 北京君以信知識產權代理有限公司 11789
• 代理人: 符彥慈

本發明公開了一株谷氨酸棒桿菌及其在發酵生產L?亮氨酸中的應用，所述谷氨酸棒桿菌為谷氨酸棒桿菌（Corynebacterium?glutamicum）cglzh1007，該谷氨酸棒桿菌cglzh1007保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC），保藏日期為2022年8月1日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，菌種保藏編號為CGMCC?No.25470。本發明采用谷氨酸棒桿菌cglzh1007，發酵結束后L?亮氨酸含量有顯著提高，副產物L?纈氨酸的含量極低，更易于L?亮氨酸的提取純化，該菌株具有良好的穩定性，培養基簡單、培養條件粗放，易于工業化放大生產，具有較好的實際應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一株谷氨酸棒桿菌及其在發酵生產L-亮氨酸中的應用。

背景技術

L-亮氨酸（L-leucine,?L-leu），別名L-白氨酸，化學名稱為L-2-氨-4-甲基戊酸，是蛋白質基本組成的天然氨基酸，屬于脂肪族類氨基酸。L-亮氨酸是人和動物無法自身合成而必須依靠外源提供的八大必需氨基酸之一，與另外兩種必需氨基酸L-纈氨酸和L-異亮氨酸都具有甲基側鏈，被統稱為支鏈氨基酸。L-亮氨酸是一種功能性氨基酸，具有廣泛的生理功能，近年來廣泛用于食品、醫藥、動物飼料及化妝品等行業。

L-亮氨酸的生產方法分為提取法、化學合成法、酶法和微生物發酵法等，其中由于微生物發酵法具有反應條件溫和、環境污染小和產品質量穩定等優點，已經發展了一定的生產規模，是最常用的工業生產方法，仍具有更廣闊的發展空間。但是目前微生物發酵法仍然存在產酸率不高、發酵雜酸較多的問題，使生產成本居高不下，發酵雜酸較多同時也一直影響著產品質量，高純度的L-亮氨酸產品一直難以滿足市場的需求。因此，選育優良的L-亮氨酸生產菌株對工業生產具有極其重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一株谷氨酸棒桿菌及其在發酵生產L-亮氨酸中的應用。

本發明提供一株谷氨酸棒桿菌，所述谷氨酸棒桿菌為谷氨酸棒桿菌（ Corynebacterium?glutamicum）cglzh1007，該谷氨酸棒桿菌cglzh1007保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC），保藏日期為2022年8月1日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，菌種保藏編號為CGMCC?No.25470。

本發明還提供一株谷氨酸棒桿菌的應用，采用谷氨酸棒桿菌cglzh1007發酵生產L-亮氨酸。使用該菌株進行發酵生產L-亮氨酸，發酵液中具有較高的L-亮氨酸含量和較低的副產物L-纈氨酸含量。

采用谷氨酸棒桿菌cglzh1007發酵生產L-亮氨酸，包括如下步驟：

將保藏的谷氨酸棒桿菌cglzh1007活化至固體斜面培養基，32℃培養24h，將活化后的斜面菌種接種于搖瓶液體培養基中，置于搖床32℃培養，將培養至對數期的搖瓶菌種接種于種子培養基內進行種子培養，培養至對數生長期接種于發酵培養基中發酵培養，發酵液提取純化后獲得L-亮氨酸晶體。

所述斜面培養基包括葡萄糖1~2?g/L、蛋白胨10~15?g/L、牛肉膏10~15?g/L、酵母膏5~10?g/L、磷酸二氫鉀1~5?g/L、硫酸鎂0.1~3?g/L、氯化鈉2.5~5?g/L、瓊脂粉15~25?g/L。

所述的搖瓶液體培養基包括葡萄糖30~50?g/L、尿素1~5?g/L、磷酸二氫鉀1~2?g/L、硫酸鎂0.1~5?g/L、多肽粉20~50?g/L、酵母浸粉5~10?g/L。

所述的種子培養基包括葡萄糖30~50?g/L、硫酸銨5~20?g/L、尿素1~5?g/L、磷酸二氫鉀1~3?g/L、硫酸鎂0.2~2?g/L、多肽粉30~50?g/L、酵母浸粉5~10?g/L。