[發明專利]一種用于檢測反義寡核苷酸類藥物的熒光探針及檢測方法

在審

• 申請號: 202310830021.5
• 申請日: 2023-07-07
• 公開（公告）號: CN116656781A
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 舒暢;胡鵬輝;黃銳艷;詹玉娟
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6816;C12Q1/6876;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 劉紅陽

本發明公開了一種用于檢測反義寡核苷酸類藥物的熒光探針及檢測方法，所述熒光探針包括MNPs?SSB分散液和RQDs?CP分散液，所述MNPs?SSB由磁球和修飾在磁球上的單鏈DNA結合蛋白構成；所述RQDs?CP由紅色熒光量子點和修飾在紅色熒光量子點上的單鏈DNA構成；所述單鏈DNA的序列與待測反義寡核苷酸類藥物的序列互補，所述單鏈DNA結合蛋白可特異性結合所述單鏈DNA。本發明的熒光探針可用于復雜生物樣品中諾西那生鈉的快速、靈敏、高通量的檢測；本方法無需洗滌、離心等復雜繁瑣的前處理，且不需要額外添加酶或底物等酶促反應，分析周期短，能夠實現高靈敏性、高特異性、快速簡便的高通量分析檢測。為諾西那生鈉及類似反義寡核苷酸藥物的藥代動力學研究及臨床用藥監測提供了技術支持。

技術領域

本發明涉及一種熒光探針及檢測方法，尤其涉及一種用于檢測反義寡核苷酸類藥物的熒光探針及檢測方法。

背景技術

脊髓性肌萎縮(Spinal?muscular?atrophy,SMA)是一種罕見的常染色體隱性遺傳神經肌肉疾病，由于運動神經元存活基因1(Survival?motor?neuron?gene?1,SMN1)致病性變異(純合缺失或突變)，修飾基因SMN2產生的全長功能性SMN蛋白不足，最終導致脊髓前角a-運動神經元變性而致病。家族中有SMA患者的人群兒童、成人均可患病，發病率為萬分之一，攜帶率為1/50～1/40。依照國際分型標準，按照發病年齡和可獲得最大運動里程碑，將SMA從重到輕分為5個類型(0～4)，其中0型SMA為出生前或出生時，無運動歷程碑，僅存活數月。1型與2型SMA通常導致患兒的壽命嚴重縮短甚至死亡，3型與4型SMA雖然不致命，但會嚴重影響患者的運動功能，導致生活質量的急劇下降。諾西那生鈉(Nusinersen?Sodium，商品名Spinraza)是全球首個SMA精準靶向治療藥物，2016年由FDA批準上市。諾西那生鈉是一種改性的反義寡核苷酸(ASO)藥物，由18個核糖核苷酸殘基組成的一段單鏈RNA(5’-UCA?CUUUCA?UAA?UGC?UGG-3’)，其中核呋喃糖基環的2'-羥基被2'-O-2-甲氧基乙基取代，磷酸鍵被硫代磷酸酯鍵取代，以降低諾西那生鈉對體外環境與體內廣泛存在的核酸酶的降解能力。研究顯示，諾西那生鈉可修飾SMN2基因剪接，促進全長功能性SMN蛋白產生，顯著改善SMA患者的生存以及運動、呼吸等重要功能，改變SMA疾病進程，且安全性和依從性良好。臨床上采用鞘內注射的方式進行多劑量給藥，由于寡合苷酸藥物的半衰期較短且極易在肝腎中蓄積，血漿與腦積液中的諾西那生鈉含量非常低，給諾西那生鈉的藥代動力學研究以及臨床治療藥物的監測帶來了巨大的挑戰。