[發(fā)明專利]一種用于治療高位截癱的干細(xì)胞培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310821036.5
• 申請(qǐng)日: 2023-07-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116622637A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何文麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海中賽德康生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0797
• 分類號(hào): C12N5/0797;C12M3/00;C12M1/00;C12M1/36;C12M1/02;C12M1/10;A61K35/30;A61P25/00
• 代理公司: 佛山市明高知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44701
• 代理人: 李娟

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于治療高位截癱的干細(xì)胞培養(yǎng)方法，涉及到生物領(lǐng)域，包括培養(yǎng)箱、無(wú)菌培養(yǎng)皿和培養(yǎng)液罐，無(wú)菌培養(yǎng)皿可拆卸設(shè)置在培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的內(nèi)部設(shè)置有轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)構(gòu)并可帶動(dòng)無(wú)菌培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)動(dòng)，培養(yǎng)液罐固定設(shè)置在培養(yǎng)箱的左側(cè)上方，培養(yǎng)液罐的下端中部固定連接有注液管，注液管的另一端固定貫穿培養(yǎng)箱的左側(cè)壁并延伸至無(wú)菌培養(yǎng)皿的上方左側(cè)，培養(yǎng)液罐的內(nèi)部還設(shè)置有自動(dòng)啟閉閥，自動(dòng)啟閉閥中的傳動(dòng)桿與轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)構(gòu)中的轉(zhuǎn)桿相互傳動(dòng)。本發(fā)明在對(duì)嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，能夠從培養(yǎng)箱內(nèi)部對(duì)無(wú)菌培養(yǎng)皿中添加營(yíng)養(yǎng)液，不需要將無(wú)菌培養(yǎng)皿取出，避免嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞受到細(xì)菌污染，便于人們使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種用于治療高位截癱的干細(xì)胞培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

干細(xì)胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞，當(dāng)前，干細(xì)胞和再生醫(yī)學(xué)的研究已成為自然科學(xué)中最為引人注目的領(lǐng)域，其中嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞作為神經(jīng)來(lái)源的成體干細(xì)胞在神經(jīng)損傷的修復(fù)中具有獨(dú)特的優(yōu)越性，哺乳動(dòng)物嗅黏膜損傷后可自我修復(fù)，其嗅受體神經(jīng)元在整個(gè)生命期可終生維持神經(jīng)組織的持續(xù)自我更新。

當(dāng)人們的脊髓損傷后，容易造成人們高位截癱，從而影響人們行走，而目前，為對(duì)人們的脊髓進(jìn)行治療，人們會(huì)提取大鼠嗅球上皮的嗅覺(jué)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，然后通過(guò)體外分離獲得大鼠的嗅覺(jué)干細(xì)胞，具有體外增殖和分化能力，并且在沒(méi)有神經(jīng)支持的情況下可以分化為具有活性的嗅覺(jué)細(xì)胞，通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞移植從而治療骨髓損傷，而在對(duì)嗅覺(jué)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要將嗅覺(jué)干細(xì)胞放置在無(wú)菌培養(yǎng)皿中并置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)需要定期向無(wú)菌培養(yǎng)皿中添加營(yíng)養(yǎng)液，但是，現(xiàn)有技術(shù)中，在對(duì)無(wú)菌培養(yǎng)皿中添加營(yíng)養(yǎng)液時(shí)，需要將培養(yǎng)箱打開(kāi)并將無(wú)菌培養(yǎng)皿取出才可添加，容易造成無(wú)菌培養(yǎng)皿中的干細(xì)胞受到細(xì)菌感染，影響嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種用于治療高位截癱的干細(xì)胞培養(yǎng)方法，有效的解決了目前在對(duì)無(wú)菌培養(yǎng)皿中添加營(yíng)養(yǎng)液時(shí)，需要將培養(yǎng)箱打開(kāi)并將無(wú)菌培養(yǎng)皿取出才可添加，容易造成無(wú)菌培養(yǎng)皿中的干細(xì)胞受到細(xì)菌感染，影響嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種用于治療高位截癱的干細(xì)胞培養(yǎng)方法，包括培養(yǎng)箱、無(wú)菌培養(yǎng)皿和培養(yǎng)液罐，所述無(wú)菌培養(yǎng)皿可拆卸設(shè)置在培養(yǎng)箱中，所述培養(yǎng)箱的內(nèi)部設(shè)置有轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)構(gòu)并可帶動(dòng)無(wú)菌培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)動(dòng)，所述培養(yǎng)液罐固定設(shè)置在培養(yǎng)箱的左側(cè)上方，所述培養(yǎng)液罐的下端中部固定連接有注液管，所述注液管的另一端固定貫穿培養(yǎng)箱的左側(cè)壁并延伸至無(wú)菌培養(yǎng)皿的上方左側(cè)，所述培養(yǎng)液罐的內(nèi)部還設(shè)置有自動(dòng)啟閉閥，所述自動(dòng)啟閉閥中的傳動(dòng)桿與轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)構(gòu)中的轉(zhuǎn)桿相互傳動(dòng)，所述培養(yǎng)箱的前側(cè)通過(guò)鉸鏈轉(zhuǎn)動(dòng)連接有箱門，還包括以下步驟：

S1、嗅上皮組織獲取，選取健康的若干雄性大鼠，并通過(guò)CO2對(duì)大鼠致死，然后斷頭后在顯微鏡下采用顯微鑷取下大鼠的嗅上皮組織，并將獲取的嗅上皮組織放入盛有解剖液的試管中；

S2、制備單細(xì)胞懸液，在試管中放入含2.4U/ml中性蛋白酶PBS溶液中37℃消化45min，PBS溶液中止消化，在顯微鏡下，用顯微器將嗅上皮的上皮層和固有層分離，分別放入PBS溶液中，上皮層組織放入含10μg/ml?DNA酶和0.125％胰酶消化10mim，固有層組織0.25％Ⅰ型膠原酶37℃消化10min，將固有層及上皮層合并后，火焰拋光的巴爾德斯管輕輕吹打，再通過(guò)1000r/min離心10min，制得含10％FBS的DMEM/F12的溶液重懸細(xì)胞；

S3、細(xì)胞培養(yǎng)，將S2中的重懸細(xì)胞放入準(zhǔn)備好的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，并將無(wú)菌培養(yǎng)皿放置在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，并通過(guò)培養(yǎng)液罐向無(wú)菌培養(yǎng)皿中添加培養(yǎng)液，獲得需要的嗅上皮神經(jīng)干細(xì)胞。