[發明專利]一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法

在審

• 申請號: 202310821036.5
• 申請日: 2023-07-05
• 公開（公告）號: CN116622637A
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 何文麗
• 申請（專利權）人: 上海中賽德康生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797;C12M3/00;C12M1/00;C12M1/36;C12M1/02;C12M1/10;A61K35/30;A61P25/00
• 代理公司: 佛山市明高知識產權代理事務所(普通合伙) 44701
• 代理人: 李娟

1.一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法，包括培養箱(1)、無菌培養皿(2)和培養液罐(3)，其特征在于，所述無菌培養皿(2)可拆卸設置在培養箱(1)中，所述培養箱(1)的內部設置有轉動機構并可帶動無菌培養皿(2)轉動，所述培養液罐(3)固定設置在培養箱(1)的左側上方，所述培養液罐(3)的下端中部固定連接有注液管(4)，所述注液管(4)的另一端固定貫穿培養箱(1)的左側壁并延伸至無菌培養皿(2)的上方左側，所述培養液罐(3)的內部還設置有自動啟閉閥，所述自動啟閉閥中的傳動桿(5)與轉動機構中的轉桿(6)相互傳動，所述培養箱(1)的前側通過鉸鏈轉動連接有箱門(7)，還包括以下步驟：

S1、嗅上皮組織獲取，選取健康的若干雄性大鼠，并通過CO2對大鼠致死，然后斷頭后在顯微鏡下采用顯微鑷取下大鼠的嗅上皮組織，并將獲取的嗅上皮組織放入盛有解剖液的試管中；

S2、制備單細胞懸液，在試管中放入含2.4U/ml中性蛋白酶PBS溶液中37℃消化45min，PBS溶液中止消化，在顯微鏡下，用顯微器將嗅上皮的上皮層和固有層分離，分別放入PBS溶液中，上皮層組織放入含10μg/ml?DNA酶和0.125％胰酶消化10mim，固有層組織0.25％Ⅰ型膠原酶37℃消化10min，將固有層及上皮層合并后，火焰拋光的巴爾德斯管輕輕吹打，再通過1000r/min離心10min，制得含10％FBS的DMEM/F12的溶液重懸細胞；

S3、細胞培養，將S2中的重懸細胞放入準備好的無菌培養皿(2)中，并將無菌培養皿(2)放置在培養箱(1)中進行培養，并通過培養液罐(3)向無菌培養皿(2)中添加培養液，獲得需要的嗅上皮神經干細胞。

2.根據權利要求1所述的一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法，其特征在于：所述轉動機構包括伺服電機(8)、轉桿(6)、支撐板(9)和支撐軸(10)，所述支撐板(9)橫向固定設置在培養箱(1)的內部下方，所述培養箱(1)通過支撐板(9)分為培養腔和加熱腔，所述加熱腔的內部設置有水浴加熱機構，所述伺服電機(8)固定設置在培養箱(1)的上內側壁中部，且伺服電機(8)的輸出端通過聯軸器與轉桿(6)的上端固定連接，所述支撐軸(10)通過第一軸承轉動設置在支撐板(9)的上側中部，所述無菌培養皿(2)可拆卸設置在轉桿(6)和支撐軸(10)之間。

3.根據權利要求2所述的一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法，其特征在于：所述無菌培養皿(2)的上下兩側中部分別固定連接有第一圓柱(11)和第二圓柱(12)，所述第一圓柱(11)和第二圓柱(12)相反的兩端分別固定連接有第一方形插桿(13)和第二方形插桿(14)，所述轉桿(6)的下端開設有圓槽，所述圓槽的內部滑動設置有圓桿(15)，所述圓桿(15)的上端固定連接有彈簧(16)，所述圓槽的側壁開設有兩個對稱分布的滑塊(17)，兩個所述滑塊(17)均與圓桿(15)的桿壁上端固定連接，所述圓桿(15)的下端中部開設有可供第一方形插桿(13)滑動插入的第一方形插槽，所述支撐軸(10)的上端中部開設有可供第二方形插桿(14)滑動插入的第二方形插槽。

4.根據權利要求3所述的一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法，其特征在于：所述無菌培養皿(2)的內部固定連接有*型隔板(18)并通過*型隔板(18)分為多個培養槽。

5.根據權利要求2所述的一種用于治療高位截癱的干細胞培養方法，其特征在于：所述水浴加熱機構包括電加熱棒(19)，所述電加熱棒(19)固定設置在加熱腔的內部，所述支撐板(9)的上側開設有多個均勻分布的透氣孔，每個所述透氣孔的內部均固定設置有透氣海綿(20)，所述加熱腔的右側下方固定連接有換水管，所述換水管上設置有控制閥。