[發明專利]一種糞便核酸提取預處理液、預處理方法、試劑盒與應用

在審

• 申請號: 202310772947.3
• 申請日: 2023-06-27
• 公開（公告）號: CN116574784A
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 蘇雨來;田仁鵬;吳成貢;劉思明;竇文祥
• 申請（專利權）人: 深圳生科原生物有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12N15/10
• 代理公司: 深圳維啟專利代理有限公司 44827
• 代理人: 邢曉葉

1.一種糞便核酸提取預處理液，其特征在于，所述預處理液包括預處理液A和預處理液B；

所述預處理液A包括NaHCO₃和/或Na₂CO₃、鹽酸胍和/或異硫氰酸胍以及非離子表面活性劑；其中，所述NaHCO₃和/或Na₂CO₃質量分數為1~10%，所述鹽酸胍和/或異硫氰酸胍濃度為0.2~8.0mol/L；所述預處理液A的pH值為7.0~12.0；

所述預處理液B包括Al³⁺和/或Fe³⁺絮凝劑和pH調節劑；其中，所述Al³⁺和/或Fe³⁺絮凝劑質量分數為1%~10%；所述預處理液B的pH值為3.0~7.0。

2.根據權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液，其特征在于，所述預處理液A還包括EDTA-2Na以及聚乙烯吡咯烷酮K30和/或聚乙烯吡咯烷酮K90；

所述EDTA-2Na濃度為0.01~0.2mol/L；

所述聚乙烯吡咯烷酮K30和/或聚乙烯吡咯烷酮K90的質量分數為1%~5%。

3.根據權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液，其特征在于，所述非離子表面活性劑包括Tween20和/或NP?40；

所述Tween20的質量分數為1~10%；

所述NP?40?的質量分數為1~10%。

4.根據權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液，其特征在于，所述pH調節劑包括(NH4)₂SO₄；所述(NH4)₂SO₄的濃度為0.1~1.0mol/L。

5.根據權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液，其特征在于，所述預處理液B還包括中性鹽；所述中性鹽采用NaCl或KCl；所述中性鹽濃度為0.1~2.0mol/L。

6.一種權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液在生物樣本處理產品或核酸提取產品領域的應用。

7.根據權利要求6所述的一種糞便核酸提取預處理液在生物樣本處理產品或核酸提取產品領域的應用，其特征在于，所述生物樣本處理產品或核酸提取產品還包括研磨顆粒；

所述研磨顆粒包括至少2種粒徑的鋯珠。

8.根據權利要求7所述的一種糞便核酸提取預處理液在生物樣本處理產品或核酸提取產品領域的應用，其特征在于，所述鋯珠包括3種粒徑的鋯珠，所述3種粒徑的鋯珠的規格分別為粒徑0.3~0.4mm、粒徑0.5~0.6mm和粒徑0.7~0.8mm。

9.一種糞便核酸提取的預處理方法，其特征在于，所述預處理方法包括如下步驟：

S1、采集糞便樣本；

S2、將糞便樣本和預處理液A混合，加入研磨顆粒，進行研磨處理，獲得完成研磨處理的樣本溶液；

S3、將完成研磨處理的樣本溶液進行離心處理，取上清液，得到樣本上清液A；

S4、將樣本上清液A和預處理液B混合，震蕩混勻處理，得到樣本液B；

S5、將樣本液B進行離心處理，取上清液，得到樣本上清液B，作為待核酸提取樣本液；

所述預處理液A和預處理液B采用如權利要求1所述的糞便核酸提取預處理液；

所述研磨顆粒包括至少2種粒徑的鋯珠。

10.一種糞便核酸提取試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的一種糞便核酸提取預處理液、至少2種粒徑的鋯珠、裂解液、洗滌液以及洗脫液；

所述裂解液各組分及濃度配比包括：Tris-Cl為0.01~1.0mol/L，異丙醇為1%~15%，鹽酸胍為1.0~6.0mol/L，EDTA-2Na為0.01~0.5mol/L，Tween20為1~10%，NP?40為1~10%；所述裂解液的PH值為7.0~10.0；

所述洗滌液包括洗滌液A和洗滌液B；

所述洗滌液A各組分及濃度配比包括：TritonX-100?為1%~10%，Tris-Cl為0.05~0.2mol/L，異丙醇為5~50%；所述洗滌液A的PH值為7.0~10.0；

所述洗滌液B各組分及濃度配比包括：乙醇40~95%?；

所述洗脫液各組分及濃度配比包括：Tris-EDTA?為0.01~0.2mol/L。