[發明專利]四氫嘧啶生物合成基因簇及發酵生產四氫嘧啶的方法

有效

• 申請號: 202310658895.7
• 申請日: 2023-06-06
• 公開（公告）號: CN116410950B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 汪利文;張繼學;肖芳斌
• 申請（專利權）人: 云合（天津）生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N9/88;C12P17/12;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 邢月

1.一種四氫嘧啶生物合成基因簇形成的突變體，其特征在于：該突變體由如SEQ?IDNO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列組成。

2.一種重組表達載體，其特征在于：該重組表達載體包含權利要求1所述的突變體。

3.一種重組四氫嘧啶生產工程菌，其特征在于：該工程菌包含權利要求1所述的突變體；所述的工程菌為大腸桿菌。

4.應用權利要求3所述的重組四氫嘧啶生產工程菌發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：包括如下步驟：將所述的生產工程菌進行種子培養，將獲得的種子液進行發酵生產四氫嘧啶。

5.根據權利要求4所述的發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：所述的發酵步驟的具體操作為：將種子液接種到發酵培養基中，經誘導、發酵后得到四氫嘧啶發酵液。

6.根據權利要求5所述的發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：所述的發酵培養基包括如下重量百分比的組分：葡萄糖1-2%；酵母粉1-2%；蛋白胨?1-2%；硫酸銨?0.2-0.3%；磷酸二氫鈉?0.1-0.3%；七水硫酸鎂0.04-0.06%；檸檬酸三鈉二水?0.004-0.006%；一水硫酸錳0.004-0.006%；七水硫酸亞鐵0.004-0.006%；所述的發酵步驟的pH值為6.8-7.2，時間為44-48小時。

7.根據權利要求5所述的發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：所述的發酵步驟的攪拌轉速為400-1100rpm，通氣量為1-2vvm，溶氧為25-30%；所述的發酵步驟還包括補料步驟；所述的補料步驟添加葡萄糖和酵母粉，保持發酵培養基中葡萄糖濃度小于等于5g/L。

8.根據權利要求5所述的發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：所述的接種步驟的接種量為5-10%。

9.根據權利要求5所述的發酵生產四氫嘧啶的方法，其特征在于：所述的誘導步驟采用的誘導劑為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷；所述的誘導劑添加量為0.05-0.1?mM/L；誘導步驟前的培養溫度為36-38℃，誘導步驟后的培養溫度為30-33℃；誘導步驟前培養基的pH值為6.8-7.2，誘導步驟后培養基的pH值為6.4-6.6，誘導OD₆₀₀值為35-45。