[發(fā)明專利]一種長雜谷2922種子純度的InDel標(biāo)記引物對及其鑒定方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310657232.3
• 申請日: 2023-06-05
• 公開（公告）號: CN116516055A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王智蘭;杜曉芬;王軍;韓康妮;李禹欣;成鍇;連世超;李顏方;張林義
• 申請（專利權(quán)）人: 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)谷子研究所（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院谷子研究所）
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發(fā)明涉及谷子純度鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種長雜谷2922種子純度的InDel標(biāo)記引物對及其鑒定方法和應(yīng)用。所述標(biāo)記引物對包括上游引物InDel?Re2632F和下游引物InDel?Re2632R，所述上游引物InDel?Re2632F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述下游引物InDel?Re2632R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。所述InDel標(biāo)記引物對能夠用于長雜谷2922種子純度的鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及谷子純度鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種長雜谷2922種子純度的InDel標(biāo)記引物對及其鑒定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

谷子，古稱粟，是我國主要栽培作物，也是我國北方地區(qū)人們喜愛的食糧之一。谷子是一個較為廣泛分布的作物,全世界谷子面積約1000萬hm²，主產(chǎn)區(qū)在亞洲，主要包括中國、印度等國家，其中中國的谷子面積和產(chǎn)量分別占世界總量的80％和85％左右,種植面積3000萬畝左右，年總產(chǎn)量約350萬噸～500萬噸。不同品種的谷子產(chǎn)量和生長性狀均不同，種子質(zhì)量也是非常重要的種植因素，種子純度則是衡量種子質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。

雜種優(yōu)勢利用是提高作物產(chǎn)量的有效途徑，谷子雜交種采用的是兩系法，母本具有約5％的自交結(jié)實率，同時由于授粉時有雜株花粉污染、收獲時機(jī)械混雜等原因，因此雜交種中除了混有一定比例的母本種子、還可能混有父本或其他雜種子，進(jìn)而影響真雜交種產(chǎn)量。目前，谷子雜交種純度的鑒定方法主要是田間鑒定方法，該方法基于在谷子苗期，雜交種和親本之間在葉片顏色和除草劑抗性存在差異，然而該方法易受環(huán)境影響，且費時費力，并不夠準(zhǔn)確。因此，尋求一種能夠用于鑒定谷子純度的分子標(biāo)記迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容

為了提高雜交種種子純度的鑒定效率，本發(fā)明提供了一種長雜谷2922種子純度的InDel標(biāo)記引物對及其鑒定方法和應(yīng)用，所述的所述InDel標(biāo)記引物對能夠用于長雜谷2922種子純度的鑒定。

本發(fā)明的第一個目的是提供了一種長雜谷2922種子純度的InDel標(biāo)記引物對，所述標(biāo)記引物對包括上游引物InDel?Re2632F和下游引物InDel?Re2632R；

所述上游引物InDel?Re2632F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述下游引物InDel?Re2632R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發(fā)明提供了上述InDel標(biāo)記引物對鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，包括如下步驟：

S1，提取樣本基因組DNA；

S2，利用InDel標(biāo)記引物對樣本基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

S3，將S2中獲得的PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測；

S4，分析S3中的檢測結(jié)果，雜交種子判斷標(biāo)準(zhǔn)為，可以同時擴(kuò)增出兩個親本特異性序列，然后根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果計算雜交種子純度，計算公式為：雜合帶型數(shù)量/有效擴(kuò)增條帶數(shù)量*100％。

進(jìn)一步地，S1中，樣本基因組DNA的提取過程為：葉片液氮速凍后研磨，加入30μL核酸釋放劑，離心，將離心后的樣品于沸水中煮3-5min，然后將樣品離心，吸取上清液，加入無菌水后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

進(jìn)一步地，S2中，PCR擴(kuò)增體系為：5.0μL?2×Lightning?Taq?PCR?Mix，1.0μL正向引物，1.0μL反向引物，1.0μL?DNA模板，2.0μL滅菌水；

所述的正向引物和反向引物的濃度均為2.0μmol?L^-1。

進(jìn)一步地，S2中，PCR擴(kuò)增程序為：94℃預(yù)變性3min，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，35個循環(huán)后，72℃終延伸10min。