[發明專利]一種長雜谷2922種子純度的InDel標記引物對及其鑒定方法和應用

在審

• 申請號: 202310657232.3
• 申請日: 2023-06-05
• 公開（公告）號: CN116516055A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 王智蘭;杜曉芬;王軍;韓康妮;李禹欣;成鍇;連世超;李顏方;張林義
• 申請（專利權）人: 山西農業大學谷子研究所（山西省農業科學院谷子研究所）
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.一種長雜谷2922種子純度的InDel標記引物對，其特征在于，所述標記引物對包括上游引物InDel?Re2632F和下游引物InDel?Re2632R；

所述上游引物InDel?Re2632F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

所述下游引物InDel?Re2632R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

2.一種采用權利要求1所述的InDel標記引物對鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，提取樣本基因組DNA；

S2，利用InDel標記引物對樣本基因組DNA進行PCR擴增；

S3，將S2中獲得的PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測；

S4，分析S3中的檢測結果，雜交種子判斷標準為，可以同時擴增出兩個親本特異性序列，然后根據統計結果計算雜交種子純度，計算公式為：雜合帶型數量/有效擴增條帶數量*100％。

3.根據權利要求2所述的鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，其特征在于，S1中，樣本基因組DNA的提取過程為：葉片液氮速凍后研磨，加入30μL核酸釋放劑，離心，將離心后的樣品于沸水中煮3-5min，然后將樣品離心，吸取上清液，加入無菌水后-20℃保存備用。

4.根據權利要求2所述的鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，其特征在于，S2中，PCR擴增體系為：5.0μL?2×Lightning?Taq?PCR?Mix，1.0μL正向引物，1.0μL反向引物，1.0μL?DNA模板，2.0μL滅菌水；

所述的正向引物和反向引物的濃度均為2.0μmol?L^-1。

5.根據權利要求2所述的鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，其特征在于，S2中，PCR擴增程序為：94℃預變性3min，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，35個循環后，72℃終延伸10min。

6.根據權利要求2所述的鑒定谷子雜交種長雜谷2922種子純度的方法，其特征在于，S4中，能夠同時擴增出序列如SEQ?ID?NO.3所示的母本特異性序列和序列如SEQ?ID?NO.4所示的父本特異性序列的樣本則為雜交種。

7.一種權利要求1所述的長雜谷2922種子純度的InDel標記引物對在種子純度鑒定中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，純度鑒定樣本為長雜谷2922。