[發(fā)明專利]長(zhǎng)林小蠹SS-COI PCR檢測(cè)引物以及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310650254.7
• 申請(qǐng)日: 2023-06-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116656835A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚艷霞;李承錦;黃誼青;林若竹;淮穩(wěn)霞;王小藝;趙文霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與自然保護(hù)研究所（國(guó)家林業(yè)和草原局世界自然遺產(chǎn)保護(hù)研究中心）
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

1.長(zhǎng)林小蠹SS-COI?PCR檢測(cè)引物，其特征在于，所述長(zhǎng)林小蠹SS-COI?PCR檢測(cè)引物由核苷酸序列為SEQ?ID?No.1所示的上游引物和核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示的下游引物組成。

2.權(quán)利要求1所述長(zhǎng)林小蠹SS-COI?PCR檢測(cè)引物在制備檢測(cè)長(zhǎng)林小蠹試劑中應(yīng)用。

3.長(zhǎng)林小蠹SS-COIPCR檢測(cè)試劑盒，包括：2×Flash?PCR?MasterMix，長(zhǎng)林小蠹SS-COIPCR檢測(cè)引物，ddH₂O；其特征在于，所述長(zhǎng)林小蠹SS-COI?PCR檢測(cè)引物由核苷酸序列為SEQID?No.1所示的上游引物和核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示的下游引物組成。

4.一種長(zhǎng)林小蠹的SS-COIPCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括：

(1)提取待檢測(cè)樣品的DNA；

(2)以待檢測(cè)樣品的DNA為模板，以權(quán)利要求1所述長(zhǎng)林小蠹SS-COI?PCR檢測(cè)上游引物和下游引物建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；

(3)如果待檢測(cè)樣品出現(xiàn)474bp的擴(kuò)增條帶，則待檢測(cè)樣品為長(zhǎng)林小蠹。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述SS-COI?PCR檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中所建立的PCR擴(kuò)增體系包括：2×Flash?PCR?MasterMix12.5μL、上游引物HLSSCOIF?1μL、下游引物HLSSCOIR?1μL、基因組DNA模板1.5μL、ddH₂O?9μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述SS-COI?PCR檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)中退火溫度為54℃或55℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述SS-COI?PCR檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)退火溫度為55℃。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述SS-COI?PCR檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?8℃預(yù)變性30s，94℃變性10s，54℃或55℃退火15s，72℃延伸15s，共34個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸1min。