[發明專利]一種二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法

在審

• 申請號: 202310649863.0
• 申請日: 2023-06-02
• 公開（公告）號: CN116554269A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李海迪;梁泰剛;靳元逵;張林艷;王廉峻;王麗偉;劉田雨
• 申請（專利權）人: 山西醫科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/13;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

一種二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，采用二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽替代固相多肽合成高分子樹脂作為多肽合成載體及氨基酸羧基端保護基團進行依替巴肽全合成，包括脫Fmoc保護的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽與氨基酸進行酰胺偶聯、二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助依替巴肽肽鏈制備、二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽及側鏈保護基團裂解脫除和線性依替巴肽氧化環合制備依替巴肽。本發明中二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽在反應媒介中具有良好的溶解性以及輔助肽鏈沉淀純化性能，實現了簡便高效、綠色經濟的依替巴肽合成。

技術領域

本發明屬于有機合成及多肽化學合成領域，涉及一種依替巴肽的合成方法，特別是涉及一種基于二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助的液相依替巴肽全合成方法。

背景技術

近年來的流行病學調查表明，國內心肌梗死發病率高達0.06%，已成為中老年人群的一大殺手。依替巴肽（eptifibatide）作為環肽類心血管系統藥物，具有藥效高、毒副作用低等優點，已得到臨床的廣泛應用，且需求量也在逐年增加。依替巴肽作為新型血細胞膜糖蛋白受體拮抗劑（GPIIb/IIIa），能夠改善外周血流和組織灌注，被公認為抗血小板的“金牌”藥物，對于治療急性冠脈綜合征（ACS）和ST段抬高型心梗具有不可替代作用。

依替巴肽最初由美國COR?Therapeutic公司開發，并于1998年在美國上市，其化合物分子是衍生自東南侏儒響尾蛇（Sistrurus?miliarius?barbouri）毒液中發現的環狀七肽，化學名稱N⁶-(氨基亞氨基甲基)-N²-(3-巰基-1-氧丙基)-L-賴氨酰基-甘氨酰基-L-α-天冬氨酰基-L-色氨酰基-L-脯氨酰基-L-半胱氨酰胺，環(1→6)二硫化物，一合成環肽。其氨基酸序列從N→C端分別為：巰基丙酸（Mpa1）、高精氨酸（Har2）、甘氨酸（Gly3）、天冬氨酸（Asp4）、色氨酸（Trp5）、脯氨酸（Pro6）、半胱氨酸（Cys7），具體化學結構及氨基酸序列結構如下式所示。

依替巴肽屬于碳末端酰胺化多肽，即肽鏈的羧基端為氨基酰胺化形式。目前，依替巴肽的合成主要包括液相多肽合成（LPPS）及固相多肽合成（SPPS）技術，且在進行依替巴肽肽鏈的碳端至氮端（C→N）延伸時，需要先將羧基端第一個氨基酸（Cys）的羧基與載體基團形成酰胺鍵，肽鏈在最終裂解后能夠直接形成碳末端酰胺化的肽鏈。

依替巴肽分子的固相合成主要以常見的高分子聚合物與連接臂Rink?Amide（化學名稱2-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)(2,4-二甲氧基苯基)甲基)苯氧基)乙酸）形成的碳末端酰胺化多肽合成樹脂為主，如Rink?Amide?MBHA樹脂、Rink?Amide?AM樹脂或MBHA樹脂等，進行依替巴肽線性肽的合成。此類樹脂均含有二苯甲胺活性基團，能與Fmoc氨基酸的羧基直接酰胺化形成酰胺鍵，裂解后直接得到末端酰胺化肽鏈，如CN?110498834A公開的一種基于Rink?Amide?MBHA樹脂載體的依替巴肽固相制備方法，CN?105585613A和CN105037496A公開的基于芴甲氧羰基氨甲基樹脂載體的依替巴肽制備方法等。但由于固相樹脂載體價格昂貴，且制備路線繁瑣以及較低的裝載率（0.3-2.0mmol/g），限制了依替巴肽的規模化生產制備。

傳統液相依替巴肽肽鏈的合成中，在每偶聯一個氨基酸后，通常需要進行色譜或者重結晶純化處理，如CN?102924569A和CN?103450346A中公開的有關依替巴肽液相制備的方法。因此，液相依替巴肽制備方法需要消耗大量的化學試劑和時間，造成試劑污染物排放，不利于大規模化的生產制備和環境保護。

隨著依替巴肽原料藥物市場需求的日益增大，以及固相和傳統液相多肽合成過程中產生的聚合物、試劑等廢料排放所造成的嚴重環境污染問題，無論從經濟成本還是從社會效益來看，目前依替巴肽的合成都缺乏綠色經濟、可規模化的制備方案。因此，有必要探索開發能夠組合液相多肽合成及固相多肽合成優勢的綠色合成方法，進而實現碳末端酰胺化依替巴肽的液相可規模化制備以及可持續的綠色生產。