[發明專利]一種二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法

在審

• 申請號: 202310649863.0
• 申請日: 2023-06-02
• 公開（公告）號: CN116554269A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李海迪;梁泰剛;靳元逵;張林艷;王廉峻;王麗偉;劉田雨
• 申請（專利權）人: 山西醫科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/13;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 太原華弈知識產權代理事務所 14108
• 代理人: 李毅

1.一種二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，是以下述結構通式（I）所示的二苯基膦酰氧基二苯甲胺作為標簽分子：

，

其中，取代基R選自H、OPOPh₂、C1～C3烷基、C1～C3烷氧基、鹵原子或NO₂；

按照下述步驟制備依替巴肽：

1）、以脫Fmoc試劑處理下述結構通式（II）所示的處于Fmoc保護狀態下的二苯基膦酰氧基Fmoc-二苯甲胺，脫除Fmoc保護基團后得到標簽分子二苯基膦酰氧基二苯甲胺；

，

2）、在偶聯試劑作用下，以所述標簽分子與Fmoc保護的半胱氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OH進行酰胺偶聯反應，生成標簽裝載的中間體化合物Fmoc-Cys(Trt)-CONH-TAG，再次脫除Fmoc保護基團，得到脫Fmoc保護中間體H₂N-Cys(Trt)-CONH-TAG；

3）、在偶聯試劑作用下，將脫Fmoc保護中間體H₂N-Cys(Trt)-CONH-TAG與Fmoc保護的脯氨酸Fmoc-Pro-OH進行酰胺偶聯反應，得到標簽裝載的中間體化合物Fmoc-Pro-Cys(Trt)-CONH-TAG，再次脫除Fmoc保護基團，得到脫Fmoc保護中間體H₂N-?Pro-Cys(Trt)-CONH-TAG；

4）、依次以Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Har-OH和Mpa(Trt)-OH為原料，分別在偶聯試劑和脫Fmoc試劑的作用下，重復進行酰胺偶聯反應和脫除Fmoc保護基團，得到標簽裝載的依替巴肽前體化合物Mpa(Trt)-Har-Gly-Asp(tBu)-?Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-CONH-TAG；

5）、以Mpa(Trt)-Har-Gly-Asp(tBu)-Trp(Boc)-Pro-Cys(Trt)-CONH-TAG所示的依替巴肽前體化合物為原料，采用酸性裂解試劑進行裂解處理，脫除依替巴肽前體化合物上的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽基團、側鏈的Trt、tBu、Boc保護基團，得到無保護的線性依替巴肽化合物Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-CONH₂；

6）、將線性依替巴肽化合物在堿性溶液中進行分子內二硫鍵的氧化環合，或者在氧化試劑存在下進行氧化環合，制備得到依替巴肽目標產物。

2.根據權利要求1所述的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，其特征是以二乙胺/乙腈混合液、哌啶/乙腈混合液、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯/二氯甲烷混合液中的一種或幾種作為脫Fmoc試劑，在15～40℃條件下攪拌反應0.5～3h脫除Fmoc保護基團。

3.根據權利要求1所述的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，其特征是采用低極性的醚類或烷烴類溶劑對二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽分子、各標簽裝載的中間體化合物和脫Fmoc保護中間體進行沉淀純化處理。

4.根據權利要求3所述的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，其特征是所述低極性的醚類或烷烴類溶劑是石油醚、正己烷、環己烷、乙醚、叔丁基醚中的一種或幾種。

5.根據權利要求1所述的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，其特征是以二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃中的一種或幾種為溶劑，使用EDCl/HOBt/DIEA、DCC/HOSU、DIC/HOBt、PyBOP/DIEA中的一種或幾種為偶聯試劑，0～40℃攪拌下進行酰胺偶聯反應0.5～5h。

6.根據權利要求1所述的二苯基膦酰氧基二苯甲胺標簽輔助液相依替巴肽全合成方法，其特征是以三氟乙酸/1,2-乙二硫醇/水/苯甲醚混合物、三氟乙酸/三異丙基硅烷/水混合物或氫氟酸/對甲基苯酚/4-甲苯硫酚混合物作為酸性裂解試劑，對依替巴肽前體化合物進行裂解處理3～5h，脫除依替巴肽前體化合物上的標簽基團和側鏈保護基團。