[發明專利]包含SHP2 C-SH2結構域的靶向HER2陽性腫瘤的CAR-T及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310631572.9
• 申請日: 2023-05-31
• 公開（公告）號: CN116655806A
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 楊寒朔;羅慧
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/16;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 重慶恩洲知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 50263
• 代理人: 易真珍

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及一種包含SHP2C?SH2結構域的靶向HER2陽性腫瘤的新型CAR?T細胞及制備方法和應用。本發明的CAR?T細胞胞外結構域為靶向HER2陽性腫瘤的納米抗體，胞內結構域包括SHP2蛋白結構域；所述SHP2蛋白結構域為C?SH2結構域，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及一種包含SHP2C-SH2結構域的靶向HER2陽性腫瘤的新型CAR-T細胞及制備方法和應用。

背景技術

人表皮生長因子受體2(Human?Epidermal?Growth?Factor?Receptor?2,HER2)是一種細胞來源的原癌基因，又稱為c-erbB-2基因，在多種腫瘤中過度表達和擴增。過多的HER2蛋白出現在腫瘤細胞表面會促進腫瘤細胞的分裂和生長，進而形成HER2陽性腫瘤。HER2過表達常見于乳腺癌、胃癌、腸癌等腫瘤中。

CAR-T細胞療法(Chimeric?Antigen?Receptor?T-Cell?Immunotherapy)全稱為嵌合抗原受體T細胞免疫療法，是一種新型的治療腫瘤的精準靶向療法。研究發現，CAR-T細胞能夠精準、快速、高效、特異地識別并殺傷腫瘤細胞，近幾年通過優化改良在協助腫瘤的治療上取得了良好的效果，是一種非常有前景且有可能治愈癌癥的新型腫瘤免疫治療研究方向。但目前CAR-T療法在不同腫瘤,尤其是在實體瘤的效果上仍存在爭議，實體瘤是CAR-T療法亟待攻克的一個具有挑戰性的目標。

Src同源2結構域蛋白酪氨酸磷酸酶(Src?homology-2domain-containingprotein?tyrosine?phosphatase?2,SHP2)是一種去磷酸化酶，屬于蛋白酪氨酸磷酸酶家族。SHP2全長由兩個SH2結構域(N-SH2和C-SH2)、一個保守的PTP結構域和一個靈活的C末端尾組成。完整的SHP2磷酸酶活性受其自身構象變化而調控，基態時N-SH2結構域與PTP結構域結合并直接阻斷其活性位點，保持自抑制構象；當SHP2的信號蛋白在被腫瘤細胞的信號激活后，上游受體酪氨酸激酶(Receptor?Tyrosine?Kinase，RTK)會觸發PD1上的pTyr(磷酸化的酪氨酸)殘基與SHP2兩個SH2結構域結合，將PTP結構域從自抑制狀態釋放，傳遞激活PD1下游信號，從而抑制T細胞活性。

綜上所述，本發明將提供一種結構改良的特異性靶向HER2陽性表達腫瘤細胞的新型CAR-T細胞，以補充現有研究的不足。

發明內容

有鑒于此，本發明的主要目的在于提供一種包含SHP2C-SH2結構域的特異性靶向HER2陽性腫瘤的新型CAR-T及制備方法和應用，具體技術方案如下。

一種靶向HER2陽性腫瘤的嵌合抗原受體，包括胞外結構域、跨膜結構域和胞內結構域，所述胞外結構域為靶向HER2陽性腫瘤的納米抗體(簡稱HER2納米抗體)，所述胞內結構域包括SHP2蛋白結構域；所述SHP2蛋白結構域為C-SH2結構域，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

進一步，所述嵌合抗原受體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

進一步，所述胞內結構域還包括4-1BB共刺激分子和CD3ζ截短信號域，其中CD3ζ優選為截短的僅含有ITAM1部分。

進一步，所述嵌合抗原受體還包括CD8鉸鏈區和跨膜區。

表達上述任一項所述的嵌合抗原受體的CAR-T細胞。

上述CAR-T細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用，所述CAR-T細胞中的SHP2?C-SH2結構域用于競爭性結合PD-1，阻礙PD-1和/或PD-L1免疫抑制信號的傳遞。

進一步，所述腫瘤為HER2陽性表達的實體腫瘤。

進一步，所述實體腫瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌或腸癌等。