[發明專利]包含SHP2 C-SH2結構域的靶向HER2陽性腫瘤的CAR-T及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310631572.9
• 申請日: 2023-05-31
• 公開（公告）號: CN116655806A
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 楊寒朔;羅慧
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/16;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 重慶恩洲知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 50263
• 代理人: 易真珍

1.一種靶向HER2陽性腫瘤的嵌合抗原受體，包括胞外結構域、跨膜結構域和胞內結構域，其特征在于，所述胞外結構域為靶向HER2陽性腫瘤的納米抗體，所述胞內結構域包括SHP2蛋白結構域；所述SHP2蛋白結構域為C-SH2結構域，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.如權利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

3.如權利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述胞內結構域還包括4-1BB共刺激分子和CD3ζ截短信號域。

4.如權利要求1所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體還包括CD8鉸鏈區。

5.一種CAR-T細胞，其特征在于，表達如權利要求1-4任一項所述的嵌合抗原受體。

6.權利要求5所述的CAR-T細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用，其特征在于，所述CAR-T細胞中的SHP2?C-SH2結構域用于競爭性結合PD-1，阻礙PD-1和/或PD-L1免疫抑制信號的傳遞。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述腫瘤為HER2陽性表達的實體腫瘤。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述實體腫瘤包括卵巢癌、乳腺癌、胃癌或腸癌。

9.權利要求4所述的嵌合抗原受體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)合成包含靶向HER2陽性腫瘤的納米抗體、CD8鉸鏈區、跨膜區、4-1BB共刺激分子、CD3ζ截短信號域和SHP2?C-SH2結構域的CAR結構；

2)用限制性內切酶分別對質粒載體和合成的CAR結構進行雙酶切，以T4連接酶連接后進行轉化和篩選培養，將得到的陽性克隆進行測序鑒定。

10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，擴增所述SHP2C-SH2結構域的引物序列如SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示。