[發明專利]一種基于生物傳感器的快速檢測沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 202310619455.0
• 申請日: 2023-05-30
• 公開（公告）號: CN116482360A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 褚海培;陳瑞愛;冼美添;徐飛;李佳慧;韓銀;馮海霞;陳思璇
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 麗水創智果專利代理事務所(普通合伙) 33278
• 代理人: 楊文

本發明適用于生物檢測技術領域，提供了一種基于生物傳感器的快速檢測沙門氏菌的方法，包括以下步驟：將待檢測牛奶高速離心后，去除上層脂肪和下層沉淀，并調節牛奶的pH值，將處理后的牛奶作為待檢測樣品；將生物傳感器與待檢測樣品進行混合，捕獲待檢測樣品中可能存在的沙門氏菌；將生物傳感器與液體培養基混合，并將得到的混合物置于能使沙門氏菌增殖的條件下進行培養；將培養物吸入無菌注射器中，利用超濾膜過濾后，利用PBS進行洗滌，洗滌后的剩余物在紫外燈照射下觀察是否有熒光，有熒光則說明有沙門氏菌，沒有熒光則沒有沙門氏菌。本發明檢測方式簡單、快速、便捷，只需根據紫外線照射后是否有熒光現象即可判斷是否存在沙門氏菌。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種基于生物傳感器的快速檢測沙門氏菌的方法。

背景技術

沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌。1885年沙門氏等在霍亂流行時分離到豬霍亂沙門氏菌，故定名為沙門氏菌屬，沙門氏菌屬有的專對人類致病，有的只對動物致病，也有對人和動物都致病，目前已發現2500多種不同類型的沙門氏菌，其中約1400余種能夠感染人類，在日常生活中，沙門氏菌主要感染動物性食品，如雞肉、雞蛋、牛奶、豬肉等，但蔬菜瓜果也能被沙門氏菌感染。沙門氏菌可引起惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、發燒等癥狀，據統計在世界各國的細菌性食物中毒案例中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首，我國的細菌性食物中毒有70％到80％是由沙門氏菌引起的。沙門氏菌感染是人們持續關注的公共衛生安全問題，沙門氏菌的快速檢測篩查是預防和控制沙門氏菌感染、保障食品安全的關鍵，因此，對于食品中沙門氏菌的檢測十分重要。

目前沙門氏菌的現行檢驗標準為GB?4789.4-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》，主要通過培養法進行檢測，此外還有聚合酶鏈式反應(PCR)以及酶聯免疫吸附測定(ELISA)等方法。但培養法檢測時間長，PCR法核酸提取操作復雜，ELISA法檢測靈敏度低，都無法進行現場快速檢測，不適用于目前快速檢測的需求，因此，迫切需要一種快速、簡便的沙門氏菌檢測方法。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種基于生物傳感器的快速檢測沙門氏菌的方法，旨在解決上述背景技術中存在的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種基于生物傳感器的快速檢測沙門氏菌的方法，包括以下步驟：

(1)將待檢測牛奶高速離心后，去除上層脂肪和下層沉淀，并調節牛奶的pH值，將處理后的牛奶作為待檢測樣品；

(2)將生物傳感器與待檢測樣品進行混合，捕獲待檢測樣品中可能存在的沙門氏菌；

(3)將步驟(2)中可能捕獲了沙門氏菌的生物傳感器與液體培養基混合，并將得到的混合物置于能使沙門氏菌增殖的條件下進行培養；

(4)將步驟(3)得到的培養物吸入無菌注射器中，利用超濾膜過濾后，利用PBS進行多次洗滌，洗滌后的剩余物在355納米紫外燈照射下觀察是否有熒光，有熒光則說明有沙門氏菌，沒有熒光則沒有沙門氏菌。

優選地，步驟(1)中，所述高速離心的轉速為12500-13000r/min，所述高速離心的時間為10-12min；所述去除上層脂肪和下層沉淀的步驟中，采用超濾膜，所述超濾膜的膜孔徑為0.25-0.3μm。

優選地，步驟(1)中，所述調節牛奶的pH值的步驟中，采用Tris-HCl溶液，調節pH值為7.7。

優選地，步驟(2)中，所述生物傳感器為免疫磁珠，所述免疫磁珠由谷胱甘肽修飾的CdTe量子點、沙門氏菌抗體與磁珠偶聯而成。

優選地，步驟(2)中，所述混合的溫度為35-38℃，所述混合的時間為25-35min。

優選地，步驟(3)中，所述增殖的條件為溫度32-37℃、pH為7-7.5。