[發(fā)明專利]一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310590401.6
• 申請日: 2023-05-24
• 公開（公告）號: CN116616177A
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發(fā)明（設計）人: 周衛(wèi)榮;周衛(wèi)信;嚴萍;周建榮;倪尉廷
• 申請（專利權）人: 德興市榮興苗木有限責任公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 嘉興恒冠知識產權代理事務所(普通合伙) 33488
• 代理人: 朱琴琴

1.一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述培養(yǎng)方法包括，紅花荷外植體的前處理、紅花荷外植體的采取、紅花荷外植體的消毒、紅花荷外植體的誘導培養(yǎng)、紅花荷芽的增殖培養(yǎng)、紅花荷芽的壯苗培養(yǎng)以及紅花荷苗的生根培養(yǎng)；

其中，所述前處理包括選取紅花荷高50～80cm中等大小的無病無蟲害的盆栽嫁接苗，將盆栽苗搬入溫室大棚遮光50％處理一個月；促使盆栽苗長出嫩芽枝條，在此期間只澆水不施肥，從盆栽苗基部澆水，避免水落到新長出嫩芽枝條上增加組培污染率；一個月之后進行采集，將采集好的紅花荷外植體進行消毒；消毒完成后進行誘導培養(yǎng)；

所述誘導培養(yǎng)基由WPM+酪氨酸100mg/L+葉酸2ml/L+6-BA?1～3mg/L+NAA0.1mg/L+糖20g/L+瓊脂5.5g/L+蘋果酸1ml/L組成，pH調至5.6～5.8，每瓶接種一個外植體；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基由WPM+葉酸2mL/L+酪氨酸100mg/L+6-BA?0.5～1.5mg/L+NAA0.1mg/L+糖20g/L+瓊脂5.5g/L+蘋果酸1mL/L組成，pH調至5.6～5.8；所述壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基由WPM+酪氨酸100mg/L+葉酸2mL/L+NAA?0～0.3mg/L+糖20g/L+瓊脂6g/L+蘋果酸1mL/L組成，pH調至5.6～5.8；所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基由1/2WPM+葉酸2ml/L+IBA0.3mg/L+糖20g/L+瓊脂6g/L+蘋果酸1mL/L組成，pH調至5.6～5.8。

2.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述誘導培養(yǎng)基由WPM+酪氨酸100mg/L+葉酸2ml/L+6-BA?1mg/L+NAA0.1mg/L+糖20g/L+瓊脂5.5g/L+蘋果酸1ml/L組成；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基由WPM+葉酸2mL/L+酪氨酸100mg/L+6-BA?0.5mg/L+NAA0.1mg/L+糖20g/L+瓊脂5.5g/L+蘋果酸1mL/L組成；所述壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基由WPM+酪氨酸100mg/L+葉酸2mL/L+NAA?0.1mg/L+糖20g/L+瓊脂6g/L+蘋果酸1mL/L組成。

3.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述采集包括將用75％的酒精消毒過的剪刀剪取紅花荷盆栽苗新長出的長約20～30cm的嫩芽枝條，去除全部葉片，剪截成帶2～3個腋芽的莖段作為外植體。

4.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述消毒包括將采集好的紅花荷外植體在超凈工作臺上先用75％的酒精消毒60s，并用手不斷搖晃；之后倒掉酒精用無菌水清洗3～5次，每次清洗一分鐘，然后倒入2％的NaClO溶液，并加入3～5滴吐溫80消毒12～15分鐘，輕輕搖晃使外植體與消毒液充分接觸。

5.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述誘導培養(yǎng)具體為，將消毒好后的外植體用無菌水清洗3～5次，每次清洗一分鐘，然后用消毒好的鑷子將消毒好的外植體夾到無菌盤中，用無菌手術刀將外植體的兩端漂白的部分切掉，將消毒好后的外植體切割成一段一個腋芽，接種在含有誘導培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中；將接種好的培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)架上黑暗培養(yǎng)7天有利于減少褐化，7天后打開燈光，燈源為冷光源，光照強度為2000lx～3000lx，光照時間為16小時，溫度為25～28℃，根據(jù)實驗結果培養(yǎng)一個月后外植體長出單芽。

6.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述增殖培養(yǎng)具體為，將誘導培養(yǎng)后的單芽從莖段上切割下來，將單芽分割成莖段接種至含有增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，每瓶接種10個莖段；光照強度為2000lx～3000lx，光照時間為16小時，溫度為25～28℃，根據(jù)實驗結果單芽接種到增殖培養(yǎng)基中30天左右會長出2～3棵芽。

7.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述壯苗培養(yǎng)具體為，將增殖培養(yǎng)基中新長出來的芽，切割成單芽接種至含有壯苗培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，每瓶接種10棵芽；光照強度為3000lx～5000lx，光照時間為16小時，溫度為25～28℃，根據(jù)實驗結果30天之后叢生芽會長成具有2～3個節(jié)和4～5片葉子的組培苗。

8.如權利要求1所述的一種紅花荷的組織培養(yǎng)方法，其特征在于：所述生根培養(yǎng)具體為，等到紅花荷中的小芽在壯苗培養(yǎng)基中長至2～3個節(jié)時，將小苗接種至含有生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，每瓶接種10棵苗；暗培養(yǎng)7天，然后打開燈管光照強度控制在3000lx-5000lx，光照時間為16小時，溫度為25～28℃，根據(jù)實驗結果30天之后會長出3條以上的根。