[發明專利]一種畢赤酵母基因編輯單一質粒及改進的基因編輯方法有效
| 申請號： | 202310574853.5 | 申請日： | 2023-05-22 |
| 公開（公告）號： | CN116286941B | 公開（公告）日： | 2023-09-29 |
| 發明（設計）人： | 黃火清;劉波;張紅蓮;徐欣欣;楊浩萌;王苑;涂濤;柏映國;張偉;羅會穎;姚斌 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/65;C12N15/63;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人： | 高宇 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酵母 基因 編輯 單一 質粒 改進 方法 | ||
1.一種畢赤酵母基因編輯單一質粒，其特征在于，所述質粒從轉錄復制起點至下游依次包?括：基因編輯元件、質粒快速消除元件，其中，
所述基因編輯元件依次包括在畢赤酵母細胞中穩?定遺傳的自主復制序列、啟動crRNA?和?gRNA?轉錄的啟動子、內切酶?Cas12a?表達盒、轉化?子正向篩選的抗性標記；所述質粒快速消除元件?MazF?依次包括鼠李糖誘導啟動子、MazF?片?段、終止子；
?所述?MazF?片段的核苷?酸序列如?SEQ?ID?No?：3?所示。
2.?根據權利要求?1?所述的畢赤酵母基因編輯單一質粒，其特征在于，所述內切酶Cas12a?表?達盒依次包括三磷酸甘油醛脫氫酶啟動子、蛋白?Cas12a?的編碼基因、基因
3.?根據權利要求?1?所述的畢赤酵母基因編輯單一質粒，其特征在于，所述轉化子正向篩選?的抗性標記為抗生素?Zeocin?的抗性基因。
4.?一種畢赤酵母基因編輯方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：?擴增目的被編輯基因的左、右同源序列；
將所述目的被編輯基因的左、右同源序列與權利要求?1?所述的畢赤酵母基因編輯單一質粒融?合；
將融合獲得的質粒轉入畢赤酵母，篩選獲得陽性轉化子；
將陽性轉化子接入含有鼠李糖的培養基中培養，通過鼠李糖誘導啟動子調控毒性蛋白MazF?表達，消除細胞中的畢赤酵母基因編輯單一質粒。
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