[發明專利]一種在線評估層析柱性能的方法及其應用

在審

• 申請號: 202310547910.0
• 申請日: 2023-05-16
• 公開（公告）號: CN116577449A
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 唐思遠;王影;沈克強;陳智勝
• 申請（專利權）人: 無錫藥明生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 余俊杰

本發明公開了一種在線評估層析柱性能的方法及其應用，包括以下步驟：S1、收集在柱層析過程中，任意不同溶液(流動相)發生置換時，層析柱出口傳感器變化(上升或下降)的讀值(電導率、紫外吸收值等)，對該變化過程中的讀值進行歸一化處理，并擬合相應的正態分布的累積分布函數；S2、基于步驟S1中的累積分布函數，得到柱效評價參數，柱效評價參數包括等板高度HETP和/或非對稱性Asymmetry。本發明旨在提供一種新型的基于正態分布和傳感器讀值轉換過程的在線評估層析柱性能的方法(Normal?Distribution?Transition?Analysis，NDTA)，替代傳統的離線測試方法、提高生產效率，并解決現有TA、DTA、GDTA等方法中存在的計算誤差大、指標不穩定、量綱不一致、或無法與傳統方法形成有效的橋接等問題。

技術領域

本發明涉及層析柱性能評估的技術領域，尤其是涉及一種在線評估層析柱性能的方法及其應用。

背景技術

以Tina?M.Larson為代表的幾位學者在文獻Larson?T?M,et?al.Use?of?processdata?to?assess?chromatographic?performance?in?production-scale?proteinpurification?columns[J].Biotechnol.Prog.2003,19:485-492中提出了基于溶液置換過程電導率變化的導數(微分)評估層析柱性能的方法(Transition?Analysis，TA)；

納森.毛在中國專利CN109923411B中，以及Ganguly在美國專利Ganguly?J,etal.Systems?and?methods?for?evaluating?chromatography?column?performance[P].US8.410,928B2.2013中使用了這一方法進行層析過程的在線柱性能評價，該方法需要計算電導率的數值微分，在實際使用時，由于傳感器采集的電導率存在較大噪音，通常需要做降噪處理，同時，數值微分和降噪通常使用固定數量的數據點計算，在變化趨勢相同、采樣頻率不同(數據點密度不同)的情況下，計算結果存在顯著差異，而常用的層析系統(例如Cytiva公司的AKTA系列)為動態采樣頻率，不同批次的原始數據采樣頻率均有所差別，從而導致實際應用過程中計算結果不穩定、指標波動大，且頻繁出現假陽性結果，誤導生產過程管理。此外，當置換過程的電導率凹凸性發生變化時，會導致所計算的導數存在多個重疊峰，使得該方法無法進一步計算相應性能參數。

Yuanyuan?Cui等人在文獻Cui?Y?Y,et?al.Using?direct?transition?analysisin?chromatography[J].BioPharm?International,2018,31(1):34-40中提出了一種直接基于置換過程電導率變化來評估層析柱性能的方法(Direct?Transition?Analysis，DTA)，該方法對置換過程本身的轉換寬度(Transition?Width)建立評價指標，但該指標與傳統方法所測定的等板高度(Height?Equivalent?to?aTheoretical?Plate，HETP)計算原理存在差異，量綱也不同，無法從數學上建立轉換關系，也無法和傳統方法進行有效的橋接。