[發(fā)明專利]一種能高效分解單氰胺和氧化亞磷酸鹽的重組枯草芽孢桿菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310523928.7
• 申請(qǐng)日: 2023-05-10
• 公開（公告）號(hào): CN116286583A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫文俊;張凱杰;陳勇;應(yīng)漢杰;陳天鵬;高勇;王丹;劉靜;王斯楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/75;C12N15/60;C12N15/53;C12R1/125
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 仲凌霞;肖明芳

1.一種重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，在枯草芽孢桿菌中表達(dá)氰胺水合酶和亞磷酸鹽脫氫酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌168；所述氰胺水合酶和亞磷酸鹽脫氫酶的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?IDNO.2所示。

3.權(quán)利要求1或2所述重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，將核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的氰胺水合酶基因和亞磷酸鹽脫氫酶基因連接在質(zhì)粒pMA5上，得到重組質(zhì)粒pMA5-ptxD-CAH；所得重組質(zhì)粒pMA5-ptxD-CAH轉(zhuǎn)入枯草芽孢桿菌中，培養(yǎng)，即得所述重組枯草芽孢桿菌。

4.權(quán)利要求1或2所述重組枯草芽孢桿菌在降低染菌危害中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述應(yīng)用，其特征在于，所述染菌危害中菌類為除權(quán)利要求1或2所述重組枯草芽孢桿菌外的其他菌；優(yōu)選為枯草芽孢桿菌168、大腸桿菌、谷氨酸棒桿菌和畢赤酵母中的任意一種或幾種菌；進(jìn)一步優(yōu)選為枯草芽孢桿菌168、大腸桿菌DH5α、谷氨酸棒桿菌ATCC13032和畢赤酵母GS155中的任意一種或幾種菌。

6.權(quán)利要求1或2所述重組枯草芽孢桿菌在分解單氰胺和/或氧化亞磷酸鹽中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或6所述應(yīng)用，其特征在于，將所述重組枯草芽孢桿菌接種于含有單氰胺和亞磷酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵，所述發(fā)酵培養(yǎng)基不含有其他氮源和磷源。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述亞磷酸鹽為KH₂PO₃。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中單氰胺的濃度為1～50

mM，優(yōu)選為20～40mM，進(jìn)一步優(yōu)選為30mM。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中亞磷酸鹽的濃度為1～30mM，優(yōu)選為10～20mM，進(jìn)一步優(yōu)選為15mM。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中還包括0.2～0.8mMMgCl₂，0.1～0.35mM?K₂SO₄，0.005～0.1mM?FeSO₄，1×10^-4～0.001mM?CaCl₂，10～90mMNaCl，40～120mM?MOPS，1～7mM?Tricine，0.1～0.8ml/L微量元素液，10～80mg/L色氨酸，5～15g/L葡萄糖；優(yōu)選為0.4～0.6mM?MgCl₂，0.15～0.3mM?K₂SO₄，0.005～0.02mMFeSO₄，1×10^-4～0.0009mM?CaCl₂，30～70mM?NaCl，60～100mM?MOPS，3～5mM

Tricine，0.3～0.6ml/L微量元素液，30～60mg/L色氨酸，8～12g/L葡萄糖；進(jìn)一步優(yōu)選為0.5～0.6mM?MgCl₂，0.2～0.3mM?K₂SO₄，0.005～0.015mM?FeSO₄，1×10^-4～0.0009mMCaCl₂，48～52mM?NaCl，78～82mM?MOPS，2～6mM?Tricine，0.3～0.7ml/L微量元素液，48～52mg/L色氨酸，8～12g/L葡萄糖。