[發明專利]一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 202310488765.3
• 申請日: 2023-05-04
• 公開（公告）號: CN116466005A
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 侯麗強;劉婷;李澤亞;安婷婷
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰諾和生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/74
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 金方瑋

1.一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，所述寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法包括：

1)配制樣品溶液：稱取樣品置于容量瓶中，溶解后定容，得到樣品溶液；

2)配制流動相A，流動相B與流動相C，經微孔膜過濾，超聲脫氣后，采用高效液相色譜儀對樣品溶液進行檢測，檢測寡核苷酸純度；

3)采用面積歸一化法進行純度結果計算。

2.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟1)中，所述樣品溶液的濃度為0.8-1.0mg/mL，溶解樣品所用的容積為純化水。

3.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，高效液相色譜儀為Agilent1290超高效液相色譜儀，配紫外檢測器和全波長檢測。

4.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，色譜柱為Thermo?Scientific^TMDionex^TMDNAPac^TMRP，色譜柱規格為長度100mm，內徑3.0mm，填料粒徑為4.0μm。

5.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，所述的流動相A為20mM?TEAA/100mM?HFIP，3％ACN；流動相B為20mM?TEAA/100mMHFIP，12％ACN，流動相C為ACN。

6.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，洗脫梯度為：0min，100％流動相A：0％流動相B：0％流動相C；45min，20％流動相A：80％流動相B：0％流動相C；45.2min，40％流動相A：0％流動相B：60％流動相C；50min，40％流動相A：0％流動相B：60％流動相C；50.1min，100％流動相A：0％流動相B：0％流動相C；60min，100％流動相A：0％流動相B：0％流動相C。

7.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，檢測條件為：檢測波長260nm；流速0.4mL/min；進樣體積10μL；柱溫60℃；進樣盤溫度4℃，稀釋劑/空白為純化水。

8.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，過濾所用的微孔膜為0.22μm。

9.根據權利要求1所述的一種寡核苷酸反相離子對液相色譜分析方法，其特征在于，步驟2)中，超聲脫氣的時間為5min。