[發明專利]一種用于半胱氨酸和microRNA生物標志物的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202310470298.1
• 申請日: 2023-04-27
• 公開（公告）號: CN116496775A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 于快;周燕;王燁菲;曹君如;葉陳對;章弘揚;胡坪;張敏
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;G01N33/68;G01N33/533;C12Q1/6806;C12Q1/682;G01N21/64;C09K11/58;B82Y20/00;B82Y30/00
• 代理公司: 上海三和萬國知識產權代理事務所(普通合伙) 31230
• 代理人: 陶芾

1.一種用于半胱氨酸的檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：包括DNA@AuNCs的合成：

a、將鏈長為15-30的聚核苷酸配制成10-200μM的儲備液，按照3-4:1-2體積比與HAuCl₄溶液混合，攪拌混勻，得到混合溶液；

b、向混合溶液中加入100-400mM檸檬酸鈉溶液，并混合均勻；然后將所得溶液在室溫黑暗中放置12-36h以促進AuNCs的形成，得到DNA@AuNCs。

2.根據權利要求1所述的一種用于半胱氨酸檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步驟a所述聚核苷酸溶液和氯金酸溶液的體積比是3-4:1；步驟a所述攪拌為磁力攪拌；步驟a所述的氯金酸溶液的濃度是0.5-5mM。

3.根據權利要求1所述的一種用于半胱氨酸檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步驟b所述檸檬酸鈉溶液濃度為100-200mM。

4.權利要求1所述方法得到的DNA@AuNCs體系在Cys定量檢測方面的應用，其特征在于：

a.將濃度為50nM-5μM的Cys溶液加入至DNA@AuNCs熒光探針中，混合均勻；然后將混合溶液置于36-38℃水浴中孵育0.5-1.5h；最后測定所得溶液在400～750nm范圍內的熒光發射光譜；

b.用熒光法檢測不同濃度的Cys標準溶液所對應的熒光強度F，以系列Cys標準溶液的濃度為橫坐標，相對熒光強度(F-F0)/F0為縱坐標，繪制濃度-熒光強度工作曲線，擬合線性回歸方程；

c.將含有Cys的實際樣品溶液加入至DNA@AuNCs熒光探針中，測定其在450nm下的熒光強度，將強度值代入至工作曲線，計算得到Cys的濃度。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：加入Cys后，DNA@AuNCs的熒光強度降低。

6.一種用于miRNA檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：包括DNA@AuNCs的合成：

a、將包含聚核苷酸和相應miRNA互補鏈的DNA配制成10-200μM的儲備液，按照3-4:1-2體積比與HAuCl₄溶液混合，攪拌混勻，得到混合溶液；

b、向混合溶液中加入100-400mM檸檬酸鈉溶液，并混合均勻；然后將所得溶液在室溫黑暗中放置12-36h以促進AuNCs的形成，得到DNA@AuNCs。

7.根據權利要求6所述的一種用于miRNA檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步驟a所述儲備液和氯金酸溶液的體積比是3-4:1；步驟a所述攪拌為磁力攪拌；步驟a所述的氯金酸溶液濃度為0.5-5mM。

8.根據權利要求6所述的一種用于miRNA檢測的DNA@AuNCs的合成方法，其特征在于：步驟b所述檸檬酸鈉溶液濃度為100-200mM。

9.權利要求6所述方法得到的DNA@AuNCs體系在miRNA定量檢測方面的應用，其特征在于：

a.將濃度為5nM-5μM的miRNA溶液加入至DNA@AuNCs熒光探針中，混合均勻；然后將混合溶液置于36-38℃水浴中孵育0.5-1.5h；最后測定所得溶液在400～750nm范圍內的熒光發射光譜；

b.用熒光法檢測不同濃度的miRNA標準溶液所對應的熒光強度F，以系列miRNA標準溶液的濃度為橫坐標，相對熒光強度(F-F0)/F0為縱坐標，繪制濃度-熒光強度工作曲線，擬合線性回歸方程；

c.將含有miRNA的實際樣品溶液加入至DNA@AuNCs熒光探針中，測定其在450nm下的熒光強度，將強度值代入至工作曲線，計算得到miRNA的濃度。

10.根據權利要求9所述應用，其特征在于：加入miRNA后，DNA@AuNCs的熒光強度降低。