[發明專利]一種人TGM3乙酰化多肽、抗原、抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310469590.1
• 申請日: 2023-04-26
• 公開（公告）號: CN116515786A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 黃國良;王寧;李文凱;汪婧;曹慧媛
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C07K19/00;C07K16/06;C07K16/40;G01N33/574;G01N33/573;G01N33/569
• 代理公司: 深圳智趣知識產權代理事務所(普通合伙) 44486
• 代理人: 崔艷崢

本發明提供了一種人TGM3乙酰化多肽、抗原、抗體及其制備方法和應用，所述人TGM3乙酰化多肽的序列為DVTDKYK(acetyl)YPEGSDC，所述抗原為所述人TGM3乙酰化多肽和載體蛋白的偶聯物。所述抗體可特異性結合所述的人TGM3乙酰化多肽。本發明還提供一種檢測試劑盒，可用于檢測發生K441位點乙酰化修飾的人TGM3蛋白。本發明的人TGM3蛋白Lys441位點乙酰化抗體可用于檢測正常細胞、腫瘤細胞以及用藥后腫瘤細胞的表達差異，探討人TGM3蛋白K441位點乙酰化對腫瘤細胞增殖、遷移侵襲等過程中的影響，為臨床腫瘤疾病的診斷或治療提供潛在的治療靶點，在疾病診斷、治療及預后判定等方面具有廣泛的臨床應用前景。

技術領域

本發明涉及抗體技術領域，特別涉及一種人TGM3乙酰化多肽、抗原、抗體及其制備方法和應用。

背景技術

惡性腫瘤是目前世界上最難解決的疾病之一，也就是人們常說的癌癥。大數據顯示全球惡性腫瘤的死亡率一直居高不下，即便某些腫瘤疾病被治療過后，患者的預后也不理想。因此有很多學者在研究各種癌癥的發病機制與機理，期望能夠得到有效治療各種癌癥的方法。此外，對癌癥的早期監測以及預后分析也尤為重要，它可以幫助醫生盡早地發現患者患癌的風險概率，起到預警作用，從而使患者能夠得到更早的治療，提高生存概率。而預后析也是一種判斷患者治愈后生存狀況的科學手段。然而無論是對癌癥的早期監測還是對患者的預后分析都離不開各種腫瘤標志物的作用，腫瘤標志物(TM)是指腫瘤組織和腫瘤細胞由于原癌基因或者抑癌基因和其他腫瘤相關基因及其產物異常表達所產生的抗原和生物活性物質。一般在正常人的組織細胞中也會有所表達，但在各類癌癥患者的組織細胞中這些標志物的表達程度要高。目前腫瘤標志物的分類也無統一的分類和命名，但這些標志物可粗略地分為細胞標志物和體液標志物。

轉谷氨酰胺酶TGM(transglutaminase)是一種依賴Ca²⁺的轉谷氨酰胺酶，廣泛存在于動植物體內，能夠催化一種蛋白質中賴氨酸殘基側鏈和另一種蛋白質中谷氨酰胺殘基的γ-酰胺側鏈之間的結合，從而形成不溶性大分子聚集體。目前已知人體中TGM家族有9種，包括TGM1、TGM2、TGM3等，TGM3首先在表皮系統中發現，能夠催化蛋白質中谷氨酰胺和賴氨酸殘基之間鈣依賴性異肽交聯的形成，以及多胺與蛋白質的結合。TGM3表達異常與許多腫瘤疾病相關，包括肝細胞癌、結直腸癌、食管鱗狀細胞癌以及口腔癌等。Hu等人發現TGM3在肝細胞癌癥患者體內高表達，且他們的預后較差。他們還發現TGM3表達降低可以抑制AKT和ERK的磷酸化，進而抑制腫瘤細胞凋亡和遷徙侵襲。Li等人通過研究NF-κB信號通路在食管鱗狀細胞癌發生發展中的作用，發現TGM3的過表達會通過該信號通路抑制食管鱗狀細胞癌細胞的增殖并且能夠誘導細胞凋亡。Wu等人發現外源性TGM3表達抑制口腔白斑細胞的增殖，并有可能向口腔鱗狀細胞癌的方向惡化。以上的研究表明TGM3在腫瘤發生發展中有著重要作用。

蛋白質乙酰化修飾是指在乙酰基轉移酶的作用下將乙酰基轉接到蛋白質分子鏈上的一種蛋白質修飾過程。它屬于蛋白質翻譯后修飾的一種，包括組蛋白乙酰化和非組蛋白乙酰化，主要發生位點在賴氨酸上。蛋白質乙酰化修飾會影響蛋白質的功能作用的發揮，比如酶的活化與失活、蛋白質穩定性、亞細胞結構定位和特殊功能復合體的形成等。組蛋白中的H3、H4發生乙酰化修飾可以激活基因轉錄。組蛋白乙酰化除了可以激活特定基因的轉錄過程外，還是一個可逆的動態調節過程，維持這種可逆的乙酰化過程對于穩定染色質的結構和調控基因表達有著至關重要的作用。非組蛋白乙酰化也參與了與生理學和疾病相關的關鍵細胞過程，如基因轉錄、DNA損傷修復、細胞分裂、信號轉導、蛋白質折疊、自噬和代謝。總之，對非組蛋白乙酰化修飾與腫瘤發生的研究加深了對腫瘤發生機制的認識，對腫瘤的治療提供了新思路和新靶點。

TGM3蛋白乙酰化修飾屬于非組蛋白乙酰化修飾，同樣也受到賴氨酸乙酰基轉移酶(KATs)的調控，目前研究表明KATs主要包括CCN5、P300以及MYST三種乙酰化酶家族。