[發明專利]一種胰腺癌類器官、培養基及培養方法

在審

• 申請號: 202310468573.6
• 申請日: 2023-04-26
• 公開（公告）號: CN116555181A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 廖傳榮;朱宇;蘭堅強;黃敏
• 申請（專利權）人: 創芯國際生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 廣州容大知識產權代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 溫純

1.一種胰腺癌類器官培養基，其特征在于，包括基礎培養和特異性添加因子，所述特異性添加因子包括如下終濃度的組分：

B27，1-5×；

EGF，10-100ng/ml；

Noggin，20-500ng/ml；

R-spondin?1，100-1000ng/ml；

Wnt3a，50-500ng/ml；

Igf?2，10-100ng/ml；

SB?505124，1-10μM；

SB?203580，1-10μM；

Y-33075，1-100nM。

2.根據權利要求1所述胰腺癌類器官培養基，其特征在于，所述基礎培養基為AdvancedDMEM/F12。

3.根據權利要求1所述的胰腺癌類器官培養基，其特征在于，所述特異性添加因子包括如下終濃度的組分：

B27，1-3×；

EGF，20-60ng/ml；

Noggin，100-400ng/ml；

R-spondin?1，100-800ng/ml；

Wnt3a，100-400ng/ml；

Igf?2，40-80ng/ml；

SB?505124，1-5μM；

SB?203580，1-5μM；

Y-33075，20-60nM。

4.根據權利要求1所述的胰腺癌類器官培養基，其特征在于，所述胰腺癌類器官培養基的制備方法為將特異性添加因子添加到基礎培養基中，混合均勻。

5.一種胰腺癌類器官的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)處理新鮮的胰腺癌樣本獲取細胞團；

2)將權利要求1～4任意一項所述的胰腺癌類器官培養基與基質膠混合得到混合液，用混合液重懸步驟1)獲取的細胞團得到細胞懸液，將細胞懸液于培養皿中種膠滴；

3)將培養皿放入CO₂培養箱內靜置，輕晃膠滴無明顯流動后倒扣，待其充分凝固；

4)向培養皿中加入將權利要求1～4任意一項所述的胰腺癌類器官培養基，置于恒溫培養箱在37℃，5％CO₂濃度下培養；每2～3天更換一次培養基，培養3～10天。

6.根據權利要求5所述的胰腺癌類器官的培養方法，其特征在于，步驟1)所述胰腺癌樣本包括手術切除標本、活體組織或惡性積液樣本；當處理的胰腺癌樣本為手術切除標本或活體組織時，獲取細胞團的方法為對樣本進行預處理，預處理的方式包括洗滌、切碎、組織塊消化、紅細胞裂解以及過濾去除雜質；當處理的胰腺癌樣本為惡性積液樣本時，獲取細胞團的方法為離心去除上清得到細胞團沉淀備用。

7.根據權利要求5所述的胰腺癌類器官的培養方法，其特征在于，步驟1)所述細胞團的細胞數量為3～100個。

8.根據權利要求5所述的胰腺癌類器官的培養方法，其特征在于，步驟2)中胰腺癌類器官培養基與基質膠的混合比例為1:0.8～3，重懸過程中細胞懸液中細胞濃度為10⁵～10⁷個/ml。

9.根據權利要求5所述的胰腺癌類器官的培養方法，其特征在于，步驟2)中一個膠滴為10～100μl細胞懸液。

10.一種胰腺癌類器官，其特征在于，采用權利要求1～4任意一項所述胰腺癌類器官培養基或使用權利要求5～9任意一項所述胰腺癌類器官的培養方法培養獲得。