[發明專利]一種具有抗氧化活性黑果枸杞籽提取物制備及主要活性成分鑒定方法

在審

• 申請號: 202310459054.3
• 申請日: 2023-04-26
• 公開（公告）號: CN116559320A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 梁現蕊;葉琴
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;A23L33/105;B01D11/02;B01D3/08;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;A61K36/815;A61P39/06;A61K131/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 龔如朝

本發明公開了一種具有抗氧化活性黑果枸杞籽提取物制備及主要活性成分鑒定方法，具體步驟包括：以干燥的黑果枸杞籽粉末為原料，以70%丙酮溶液為提取溶劑，在料液比為1:10的條件下，超聲輔助提取3次，超聲功率100?W，超聲時間30?min，合并提取液，8000?rpm離心10?min，上清液經蒸發去除溶劑，經冷凍干燥后得黑果枸杞籽提取物。采用2,2?二苯基?1?三硝基肼（DPPH）對黑果枸杞籽提取物的抗氧化性活性進行測試，通過離線DPPH?UPLC法進一步識別提取物中的抗氧化成分，并運用超高效液相色譜?串聯四極桿飛行時間質譜(UPLC?QTOF?MS/MS)技術對提取物中的抗氧化活性成分進行了鑒定。本發明方法操作簡單、提取率高，為開發和利用黑果枸杞中抗氧化活性成分以及黑果枸杞的綜合利用提供新思路。

技術領域

本發明涉及一種從黑果枸杞籽中制備具有抗氧化活性提取物及對其中的主要活性成分進行鑒定的方法，屬中藥天然產物活性成分提取與鑒定技術領域。

背景技術

黑果枸杞(Lycium?ruthenicum?Murr.)是茄科枸杞屬植物，主要分布在新疆、寧夏、西藏、甘肅和青海等地。其果實味甜多汁，常作為民間藥物和營養食品。有研究表明黑果枸杞富含多種生物活性成分，具有抗氧化、抗疲勞、抗輻射、降血糖等作用。(張弓,陳莎莎,周武等.黑果枸杞的功用考證及研究進展[J].華西藥學雜志,2019,34(06):638-642.)。然而黑果枸杞類產品在生產和加工過程中，其副產物黑果枸杞籽沒有得到有效利用，造成極大的資源浪費和環境污染。通過鑒定黑果枸杞籽中的化學成分，可為合理開發利用黑果枸杞資源提供有價值的研究數據參考。

機體內自由基處于不斷產生與清除的動態平衡之中，但當自由基產生過多或者清除過慢，將會導致一系列的氧化應激反應，從而會誘導多種疾病如神經退行性疾病、心血管疾病、糖尿病和癌癥等(蔡小華,李小偉,李國坤等.辣木葉水提物對H₂O₂致HepG2細胞氧化損傷的保護作用[J].現代食品科技,2021,37(10):62-69+111.)。已有黑果枸杞提取物制備方法和具有抗氧化活性的報道，中國專利(CN113841894A)公布了黑果枸杞花青素提取物及凍干粉的制備方法，該提取物具有較強的抗氧化和抗衰老保健功效。中國專利(CN102879500A)公布了一種采用DPPH-HPLC法檢測黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，用該方法操作簡單方便，可以實現對黑果枸杞果汁中抗氧化成分進行有效性的評價。中國專利(CN110079383A)公布了一種黑果枸杞油脂及其制備方法，通過超聲波輔助有機試劑提取黑果枸杞籽油脂，提取率為88.79％，酸價為0.74mg/g。但有關黑果枸杞籽中抗氧化性物質的制備和應用很少有報道。

發明內容

基于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種黑果枸杞籽抗氧化活性提取物制備及活性成分快速篩選方法。

本發明采用的技術方案如下：

一種具有抗氧化活性黑果枸杞籽提取物制備及主要活性成分鑒定方法，提取物制備及活性成分鑒定包括以下步驟：

1)將黑果枸杞籽干燥后研磨，過篩，得黑果枸杞籽粉末；

2)將步驟1)所得干燥的黑果枸杞籽粉末為原料，與提取溶劑以1g:5～40mL的料液比混合，然后超聲提取10～50min，重復提取3次，合并上清液，離心，上清液經旋轉蒸發除去溶劑，最后放入冷凍干燥機中冷凍干燥得到黑果枸杞籽提取物；

3)將步驟2)所得黑果枸杞籽提取物進行DPPH抗氧化活性測試；

4)將步驟2)所得黑果枸杞籽提取物經UPLC分析，得UPLC色譜圖；采用離線DPPH-UPLC聯用技術法，對步驟2)所得黑果枸杞籽提取物中的抗氧化活性成分進行分析，確定具有抗氧化活性的目標峰；

5)進一步采用UPLC-QTOF-MS/MS法對提取物中的抗氧化活性成分進行鑒定，確定分子結構。