[發(fā)明專利]一種用于牛復(fù)合鑒定多態(tài)性遺傳標(biāo)記的引物組、試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310455722.5
• 申請日: 2023-04-25
• 公開（公告）號: CN116334250A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張素華;李成濤;夏若成;陶瑞旸
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué);司法鑒定科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 深圳博敖專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44884
• 代理人: 趙逸蔓

本發(fā)明公開了一種用于牛復(fù)合鑒定多態(tài)性遺傳標(biāo)記的引物組、試劑盒及其應(yīng)用，屬于分子鑒定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明引物組或試劑盒可以一次性同時擴(kuò)增得到13個具有良好多態(tài)性和高個體識別力的STR基因座信息。本發(fā)明所述的引物組或試劑盒適用于牛的生物樣本，具有靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性強及準(zhǔn)確性高等特點，其為牛的種屬鑒定、個體識別、親緣鑒定等提供有效的檢測手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子鑒定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于牛復(fù)合鑒定多態(tài)性遺傳標(biāo)記的引物組、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，DNA技術(shù)在繁育優(yōu)良動物品種、保障食品質(zhì)量安全和打擊違法犯罪等方面有著廣泛的研究和應(yīng)用。隨著與動物相關(guān)的民事和刑事案件越來越多，利用DNA技術(shù)對各種動物進(jìn)行物種鑒定、種內(nèi)譜系關(guān)系鑒定和個體識別的需求也日益增大。牛作為畜牧業(yè)中最常見的動物之一，也是許多民事糾紛和違法犯罪中的主要對象。

在現(xiàn)代牧場育種中，人工授精和胚胎移植等方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于奶牛、肉牛的繁殖育種。與此同時，建立和完善動物系譜圖譜，明確動物之間親緣關(guān)系，進(jìn)行有效的留種，對于遺傳繁育意義重大。此前，Visscher等通過對568頭英國奶牛的研究發(fā)現(xiàn)，毛發(fā)樣本系譜錯誤率為8.8％，牛奶樣本系譜錯誤率為13.1％，總體系譜記錄錯誤率為10％；Geldrmann等發(fā)現(xiàn)德國奶牛系譜錯誤率為13％，導(dǎo)致牛奶和乳脂產(chǎn)量降低8％-16.9％。研究結(jié)果說明，在部分情況下仍存在無法確認(rèn)牛個體間血緣關(guān)系以致影響育種工作開展的情況。此外，在種公牛冷凍精液生產(chǎn)和質(zhì)量檢測實踐中，個別商販有意進(jìn)行以次充好的違法犯罪活動。而隨著當(dāng)代社會的發(fā)展、人類人口規(guī)模的增長和社會富裕程度普遍提高，不同動物肉類消費逐年升高，世界各地偶爾會發(fā)生肉類欺詐和摻假事件，不僅嚴(yán)重破壞了市場秩序，還增加了宗教和種族沖突的風(fēng)險。因此，采取有效措施(如開發(fā)準(zhǔn)確的肉類物種鑒定技術(shù))以確保肉類產(chǎn)品真實性對解決上述問題具有重要的現(xiàn)實意義。

短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandem?repeats，STR)是核心序列由2-6個堿基串聯(lián)組成的寡核苷酸序列，因其具有靈敏度高、鑒別能力強、種屬特異性好、準(zhǔn)確性高以及易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于司法鑒定領(lǐng)域的個體識別、親緣鑒定和群體調(diào)查，并成為司法鑒定中應(yīng)用最廣泛的遺傳標(biāo)記。同樣地，針對動物STR基因座的研究也逐漸發(fā)展起來。2012年，Ogden等構(gòu)建了15個STR基因座的檢測體系用于對狗進(jìn)行個體識別和親緣鑒定。2013年，Rosa等用包含24個STR基因座進(jìn)行山谷貝利切羊的親緣鑒定。2014年，美國賽默飛公司推出了針對牛的商業(yè)化試劑盒(Stock?Kits?for?Cattle)，包含11個STR基因座，但各STR基因座圖譜中分型效果差，且試劑盒價格高。

此外，現(xiàn)有研究中涉及的牛STR基因座的核心序列大多是二核苷酸重復(fù)，擴(kuò)增時會產(chǎn)生較高的stutter峰，不利于法醫(yī)學(xué)鑒定應(yīng)用，而四核苷酸重復(fù)的STR基因座較少，進(jìn)行親緣關(guān)系鑒定的累計非父排除率較低。因此，開發(fā)包含多個有效的牛STR基因座的國產(chǎn)試劑盒，對涉及牛的民事糾紛和違法犯罪中牛檢材種屬的鑒定、身份的確定及其親代來源判定等具有重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的提供一種用于牛復(fù)合鑒定多態(tài)性遺傳標(biāo)記的引物組、試劑盒及其應(yīng)用，實現(xiàn)牛的種屬鑒定、個體識別及親緣鑒定，為建立牛的STR數(shù)據(jù)庫提供理論基礎(chǔ)和檢測方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

技術(shù)方案一：一種用于牛復(fù)合鑒定多態(tài)性遺傳標(biāo)記的引物組，包括：

用于擴(kuò)增THLA126的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

用于擴(kuò)增BT66的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；

用于擴(kuò)增BT165的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示；