[發明專利]一種用于牛復合鑒定多態性遺傳標記的引物組、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202310455722.5
• 申請日: 2023-04-25
• 公開（公告）號: CN116334250A
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 張素華;李成濤;夏若成;陶瑞旸
• 申請（專利權）人: 復旦大學;司法鑒定科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 深圳博敖專利代理事務所(普通合伙) 44884
• 代理人: 趙逸蔓

1.一種用于牛復合鑒定多態性遺傳標記的引物組，其特征在于，包括：

用于擴增THLA126的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

用于擴增BT66的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；

用于擴增BT165的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示；

用于擴增ETH10的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：8所示；

用于擴增CSM0113的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：10所示；

用于擴增INRA005的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：12所示；

用于擴增BT54的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：14所示；

用于擴增BT61的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?16所示；

用于擴增INRA023的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?18所示；

用于擴增BM2113的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?20所示；

用于擴增G18833的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?22所示；

用于擴增UMN0929的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：23所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?24所示；

用于擴增INRA063的上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：25所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO?26所示。

2.一種包括權利要求1所述引物組的試劑盒。

3.一種利用權利要求1所述的引物組或權利要求2所述的試劑盒對牛的13個STR基因座進行檢測的方法，其特征在于，包括利用所述引物組對牛樣本進行PCR復合擴增后，取PCR擴增產物進行分型檢測。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述引物組中各對引物的反應終濃度具體為：THLA126基因的上游引物和下游引物分別為1.5μM；BT66基因的上游引物和下游引物分別為0.6μM；BT165基因的上游引物和下游引物分別為0.6μM；ETH10基因的上游引物和下游引物分別為1μM；CSM0113基因的上游引物和下游引物分別為2.5μM；INRA005基因的上游引物和下游引物分別為2.5μM；BT54基因的上游引物和下游引物分別為1.5μM；BT61基因的上游引物和下游引物分別為2.25μM；INRA023基因的上游引物和下游引物分別為2.5μM；BM2113基因的上游引物和下游引物分別為3μM；G18833基因的上游引物和下游引物分別為2.5μM；UMN0929基因的上游引物和下游引物分別為4μM；INRA063基因的上游引物和下游引物分別為5μM。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述復合擴增的反應體系還包括：2×Multiplex?PCR?MasterMix、5×Q-Solution、10×引物混合液、去離子水以及基因組DNA。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述復合擴增的反應程序為：95℃預變性15min；94℃變性30s，57℃退火90s，72℃延伸90s，共30次循環；60℃終延伸60min；4℃保溫。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述引物組中每對引物中至少一條引物采用熒光染料標記，所述熒光染料選自6FAM、HEX、TRMRA或ROX。

8.一種根據權利要求1所述的引物組或權利要求2所述的試劑盒或權利要求3-7任一項所述的方法在牛的種屬鑒定、個體識別以及親緣關系鑒定中的應用。