[發明專利]血液樣本抗癲癇類藥物檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202310444549.9
• 申請日: 2023-04-23
• 公開（公告）號: CN116500158A
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 賈子強;栗琳;周立;雒琴;江偉;丁亮;王麗君
• 申請（專利權）人: 北京豪思生物科技股份有限公司;江蘇豪思生物科技有限公司;湖南豪思生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發明提供了一種血液樣本抗癲癇類藥物檢測方法和試劑盒，涉及藥物檢測的技術領域。該檢測方法檢測的抗癲癇類藥物包括卡馬西平、環氧卡馬西平、奧卡西平、10,11?二氫?10?羥基卡馬西平、苯妥英鈉、拉莫三嗪、左乙拉西坦、普瑞巴林、加巴噴丁、托吡酯、丙戊酸、苯巴比妥和拉科酰胺。該檢測方法包括將經過前處理的待測樣本使用高效液相色譜串聯質譜檢測，將檢測值帶入標準曲線中，計算得到血液樣本中抗癲癇類藥物的含量；前處理包括采用采用沉淀劑處理待測樣本，沉淀劑中含有內標，內標為抗癲癇類藥物的同位素。該檢測方法具有快速，高效，準確，操作簡便，樣本用量少等優點。

技術領域

本發明涉及藥物檢測技術領域，尤其是涉及一種血液樣本抗癲癇類藥物檢測方法和試劑盒。

背景技術

傳統的抗癲癇藥物卡馬西平、苯妥英鈉等具有狹窄的藥物治療窗口，容易發生肝功能損害等不良反應，故需要通過監測其血藥濃度來評估其療效，并避免不良反應的發生。新型抗癲癇藥物加巴噴丁、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奧卡西平、普瑞巴林、托吡酯、拉科酰胺、丙戊酸、苯巴比妥等盡管相對安全有效，但患者的年齡、性別、聯用其他酶抑制劑和酶誘導劑均會對其血藥濃度產生影響，從而影響療效并誘發不良反應，對新型抗癲癇藥物進行治療藥物監測對確定合理的治療方案同樣具有積極的臨床意義。

癲癇藥物的治療藥物監測方法主要有免疫法和色譜法兩種。免疫法主要基于抗原與特異的抗體反應，進而通過酶與底物反應、熒光偏振反應和化學反應等，來進行定量檢測，屬于間接分析方法，特異性較差。當待測藥物與其他類似結構的干擾物一起進行檢測時，免疫法較難將它們完全區分開。比如卡馬西平和其中間代謝產物10,11-環氧卡馬西平，具有十分接近的化學結構，有著類似的抗原表區，都可發生抗原抗體反應，采用免疫法較難將它們完全區分開，從而影響對藥物濃度的準確定量及療效評估。

色譜分析法是用物理方法將待測成分從其他的干擾物或結構相似的混合物中分離出來。常用的色譜法包括高效液相色譜法(High-performance?Liquid?Chromatography,HPLC)、液相色譜串聯質譜檢測法(Liquid?Chromatography-tandem?Mass?Spectrometry,LC-MS/MS等。LC-MS/MS特異性高，可以在短時間內同時測定分析多種化學結構，目前已有以HPLC、LC-MS/MS檢測單一或少數幾種抗癲癇藥物的方法。

如代靜等人在2020年采用超高效液相色譜-串聯質譜法在9分鐘內定量12種抗癲癇藥物，藥物的線性范圍為12.5-2500μg/L，定量限較高無法滿足臨床監測的需要，其分析時間太長、測定樣品量200μL無法實現高通量，且12種藥物不包含奧卡西平重要的活性代謝產物10-羥卡馬西平。鄒繼華等人報道了采用液相色譜法測定人血清中5種抗癲癇藥物的方法，抗癲癇藥物的定量限較高(10μg/mL)，且樣品處理方法為耗時的液液萃取法，與高效液相色譜串聯質譜法(HPLC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度較低。這些技術中，HPLC-MS/MS的靈敏度最高，這是由于其具有較高的選擇性。然而，包括固相萃取和液液萃取在內的樣品預處理過程相對復雜，例如，用溫和的氮氣流分離離心后的有機層并在40℃下蒸發干燥。這種預處理不僅增加了操作的復雜性，降低了處理量，而且還導致了不良的有機污染，這是臨床實驗室難以接受的。

CN112946101A公開了一種同時測定多種抗癲癇藥物在血液中含量的方法及其應用，采用蛋白沉淀法結合HPLC-MS/MS測定9種抗癲癇藥物卡馬西平、10-羥卡馬西平、奧卡西平、左乙拉西坦、托吡酯、丙戊酸、苯妥英鈉、苯巴比妥和拉莫三嗪在血漿中的含量。其未包卡馬西平的活性代謝物-環氧卡馬西平，同時未包含加巴噴丁及普瑞巴林兩種藥物。且該方法適用于動物體內藥代動力學研究，檢測范圍無法覆蓋臨床患者體內藥物濃度，不能用于臨床TDM。同時方法采用正離子監測模式，不利于酸性化合物如丙戊酸，產生適宜的加和離子信號。